一、细胞融合的扫描电镜初步观察（论文文献综述）
孙聪慧[1]（2021）在《羟基磷灰石涂层材料的生物安全性及有效性研究》文中认为现在治疗关节炎等病症的主要方法是人工髋关节置换术,3D打印具有成型速度快、可以制造出结构复杂的零件、打印结构的精密度高等优点,很多3D打印材料为了改善材料的性能添加涂层,例如生物活性涂层羟基磷灰石（HA）,但是涂层的安全性和生物相容性仍需要确认。本研究对3D打印的有HA涂层和无HA涂层两种髋臼杯材料进行了生物安全性和有效性的评价,判断羟基磷灰石涂层对3D打印钛合金材料安全性和有效性的影响。1)通过扫描电镜观察比较有羟基磷灰石（HA）涂层的材料和无羟基磷灰石（HA）涂层的材料的区别。在扫描电镜下两者存在很大的差异,无HA涂层的材料表面粗糙但结构比较清晰,孔径有一定规律可循,而有HA涂层的材料表全部被HA的碎片所覆盖,且孔径结构受到一定阻碍;计算比较两者的孔隙率,无HA涂层材料孔隙率为66.0%;有HA涂层材料的孔隙率为51.9%。结果表明HA涂层对材料孔隙率有一定影响。2)通过细胞增殖、粘附和细胞与材料间相互作用试验比较有HA涂层和无HA涂层两种材料的细胞相容性,从而判断HA涂层对材料细胞相容性的影响。表明无涂层材料比有涂层材料更有利于细胞增殖;而有HA涂层材料更适合细胞粘附,在扫描电镜下却很难在有涂层的材料上观察到细胞,表明HA涂层对细胞增殖、粘附有一定影响。3)通过Bhas42细胞系转化试验、细胞毒、刺激、致敏、急性毒性、回复突变和小鼠淋巴瘤试验比较有HA涂层和无HA涂层两种材料的体外体内的安全性,从而判断HA涂层对材料生物安全性的影响。结果显示有HA涂层组和无HA涂层组启动试验和促癌试验均没有发现细胞转化灶,可以判定HA涂层并没有造成材料的致癌;在细胞毒性、刺激、致敏、急性毒性、回复突变和小鼠淋巴瘤试验中有涂层和无涂层材料均没有表现出毒性,判定HA涂层对该材料的安全性没有影响。4)在骨植入实验中,植入后第4周取材micro CT结果发现两种材料均有骨长入的情况,且骨长入的密度很难看出区别,说明两种材料均适合骨骼的长入;但在植入第8周取材micro CT结果中发现无HA涂层组的骨长入密度明显的高于有HA涂层材料组,证明了无HA涂层的材料具有更好的骨整合能力。在本研究中HA涂层并没有对钛合金材料一系列的安全性造成不良的影响,但是在体外细胞相容性方面,HA涂层会对细胞增殖有一定的影响。造成这种现象的可能原因是羟基磷灰石涂层改变了原来钛合金材料的孔隙结构,使细胞增殖和粘附产生了差异。因此3D打印材料尤其是应用于骨科的材料,不能只一味地追求涂层带来的好处,也要考虑到HA涂层带来的不良影响。
许明宸[2]（2021）在《溶藻菌筛选、复合菌剂制备及在养殖尾水中的应用研究》文中指出随着中国工业的发展,环境问题也接踵而至,其中湖泊水体富营养化问题严重影响生态环境和生命健康安全。微生物控藻法因其生态安全性好、专一性强等优势具有较好的应用前景。本研究以富营养化水体中常见的铜绿微囊藻作为微生物法控藻的研究对象,以太湖土着田螺体内筛得的R1菌为受试菌株,构建了R1菌生长动力学和溶藻动力学,进而采取原生质体融合的方式制备溶藻、脱氮除磷双效功能菌XR1,通过对复合菌剂结合潜流湿地模拟装置的实际净化效能研究,最后将人工湿地系统成功应用于常州市前黄镇杨家圩蟹池示范基地,实现了尾水零排放的目标,取得的主要研究成果包括以下5个方面:溶藻菌R1的溶藻特性方面:溶藻菌R1筛自太湖蓝藻爆发水域生长的田螺体内,实验结果表明R1菌（芽孢杆菌）具备高效溶藻能力且溶藻后藻液无毒性,不会对水体造成二次污染。其中,当R1处于对数增长期,在1:10的菌藻比,3338.26 mg·m-3的初始藻液浓度下,R1菌发酵液在7 d内可以达到89.37%的溶藻能力。溶藻实验结果证明了在合适的溶藻环境中可以最大限度发挥R1菌的溶藻能力,且仅当R1菌浓度达到一定值时才能产生溶藻作用,不同初始藻浓度会影响最终微囊藻的去除率,通常初始藻浓度越高,溶藻效果越明显,达到最佳溶藻效果的时间越短。微囊藻的溶藻动力学构建方面:R1菌的生长曲线符合Logistic模型,微囊藻中叶绿素a（Chla）的降解曲线符合一级动力学模型。在溶藻进程中,处对数增长期的R1菌溶藻能力最强,溶藻完成藻液时Chla含量与溶藻时间呈反比关系。其中微囊藻的降解动力学模型[Chla]=4831.82071×e-0.0241t可用于预测溶藻过程中溶藻菌对铜绿微囊藻液的降解效果。通过研究R1菌的溶藻机理发现,R1菌不但通过分泌一些耐高温的溶藻物质进行间接溶藻,同时会直接攻击藻细胞或以微囊藻为食从而直接溶藻,当微囊藻细胞破裂后,会分解出芳环结构的氨基酸、酰胺和其他物质。复合菌剂XR1的构建方面:通过细胞融合技术成功融合溶藻菌R1与反硝化聚磷菌B8的原生质体,从而构建出兼具双亲特点的双效工程菌XR1菌,该菌兼具溶藻、脱氮除磷功能。通过响应面分析法找到了XR1菌的最佳溶藻条件(温度为27.17℃、pH为7.66、摇床转速为152.81 r·min-1),发现3因素之间存在交互作用,影响溶藻率的主次顺序依次为温度>pH>摇床转速。7 d内XR1菌的溶藻、脱氮除磷效率分别达到93.95%、58.39%、61.7%。通过运用三维荧光和生物电镜（EDS）对比溶藻前后产物,发现XR1菌不但以铜绿微囊藻为碳源进行直接溶藻,还能吸收水体中氮、磷等营养元素进行间接溶藻。改良版潜流湿地效能方面:垂直潜流湿地系统在50 d内对蟹池养殖尾水中TN、TP、CODMn和Chla均有较好的降解能力,平均降解率分别达到86.29%±2.77%、91.19%±1.18%、70.88%±3.10%、90.95%±1.64%,系统净化后养殖尾水可实现达标排放。改良版潜流湿地结合了表面溢流和沼泽过滤的特点,其净化主要以滤石层的物理吸附为主,人为投加菌剂为辅。其中,火山石滤料层对系统中氮、磷的净化做出了极大贡献,但需定期更换滤料以保持持续净化效果,复合菌剂的投入可在短期内完善并提升系统的整体净化能力,随着生物膜上微生物的富集,逐步取代了复合菌剂的效能。人工湿地净化效能方面:改良版的人工湿地成功应用于蟹池尾水的净化工作,达到养殖尾水达标零外排的净化效果。运行中的人工湿地对蟹池尾水中的NH3-N、TN、NO3-N、TP的去除效果较好,分别达到92.3%、77.5%、88.6%、87.1%,该系统对降解尾水中氨氮有较好效果,各实验周期中污染物的降解趋势均符合一级动力学方程。随着湿地运行的延续,复合菌剂逐步被系统内富集的菌落所取代,底泥中的优势菌为变形菌门,该菌门内含有多种具备氨化,硝化和反硝化作用的细菌。小球藻属在各周期都有出现,代表α级-贫营养性水质的指示藻类如新月藻属、角星鼓藻属等在系统运行中后期相继出现,表明蟹池尾水中污染物被有效降解,从而使水质得到明显改善。综上所述,本次的研究改良了传统潜流湿地并成功应用于蟹池养殖示范基地,湿地结合适配菌剂的使用可建立快速而稳定的净化系统,实现了养殖尾水零排放的目标。在湿地运行期间,观察生物相的变化可了解系统运行情况,同时可通过人为投加菌剂来应对局部爆藻情况,本实验建立的微囊藻降解动力学方程也可用于预测除藻过程。
蔡金池[3]（2021）在《磁性纤维蛋白—琼脂糖水凝胶的制备、表征、生物相容性及复合人脐带间充质干细胞的体外软骨构建》文中进行了进一步梳理关节软骨是覆盖在关节表面,起着缓冲和润滑的特殊结缔组织,是滑膜关节重要的结构和功能单位。在临床上,关节软骨损伤（Articular cartilage injury）比较常见,包括退行性变的骨性关节炎、炎症性的类风湿性关节炎、机械损伤性的创伤性关节炎。由于关节软骨中缺乏血管、神经组织和淋巴管的分布,缺乏能够修复损伤未分化细胞,并且向缺损区域移行受到软骨细胞的细胞外基质限制,软骨损伤后自愈能力有限。目前临床修复软骨损伤的方法包括关节镜下清创术、微骨折术、自体软骨细胞移植术、自体骨软骨移植、同种异体软骨移植,但都有各自的缺点和不足。近年来,随着软骨组织工程学的发展,以人脐带来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）作为种子细胞,这得益于其来源广泛、增殖能力良好、多分化潜能,使其在软骨修复应用中具有很好的应用前景。同时磁性复合生物纳米材料也由于其良好的机械性能、生物相容性等优点,在软骨组织工程研究中表现出了引人入胜的前景。本实验以组织工程学和纳米材料学为研究思路,将羟基修饰的四氧化三铁（Fe3O4）纳米（100nm）颗粒、纤维蛋白、低熔点琼脂糖、氨甲环酸、氯化钙等作为原材料,制备不同浓度的新型磁性纤维蛋白-琼脂糖水凝胶细胞支架,并对其宏观、扫描电镜、显微镜、孔隙率、溶胀度、VSM、XPS、热重分析以及与人脐带来源间充质干细胞的生物特性进行研究,筛选出最佳表征的新型磁性复合细胞支架,并引入静磁场,进行充质干细胞的成软骨分化培养的研究和分析。从而为之后的关于软骨缺损的实验研究和临床治疗提供一种选择。第一部分磁性纤维蛋白-琼脂糖复合支架的制备、表征及生物相容性目的制备含有不同浓度磁性纳米颗粒的生物磁性纤维蛋白-琼脂糖复合水凝胶（Magnetic fibrin–agarose hydrogels,MFAH）,并对其理化性质进行表征及生物相容性进行检测,为后续实验筛选出合适的软骨组织工程学的细胞支架。方法:制备含有不同浓度羟基修饰磁性纳米颗粒（Fe3O4）的纤维蛋白-琼脂糖复合支架,对其宏观、扫描电镜、显微镜、孔隙率、溶胀度、震动样品磁强计（Vibrating sample magnetometer VSM）、X射线光电子能谱仪（X-ray Photoelectron Spectroscopy,XPS）、热重分析、机械性能进行表征,并将不同种类的磁性复合细胞支架与P3代的脐带来源间充质干细胞进行共培养,分别在0h、24h、48h、72h采用CCK8法分析不同种类的磁性复合细胞支架对细胞增殖的影响,从而筛选出最佳浓度纳米颗粒的复合生物支架,进行后续实验。结果:磁性纳米颗粒（Fe3O4）加入到纤维蛋白-琼脂糖中,改变其理化性质,如缩短了纤维蛋白-琼脂糖水凝胶（FAH）的成胶时间、支架结构更加规整、降低了孔隙率、孔径更加均匀、增加了弹性模量、具备了磁性等,另外5%MFAH表现出了良好的生物相容性。结论:1.磁性纳米颗粒（Fe3O4）可以作为磁性细胞支架的添加物、改善细胞支架的理化性质。2.5%MFAH具有稳定的机械性能、良好生物相容性、磁性,有作为软骨组织工程研究支架的潜力。第二部分人脐带来源间充质干细胞的分离、培养、鉴定、冻存及软骨组织工程学研究目的:研究人脐带华通胶（Wharton’s Jelly,W J）来源的间充质干细胞的分离、培养、冻存及鉴定,并以其作为种子细胞、筛选出5%磁性纤维蛋白-琼脂糖复合水凝胶（MFAH）作为支架,进行脐带间充质干细胞的成软骨分化研究。方法:从人脐带华通胶（Wharton’s Jelly）中分离、培养间充质干细胞,并对其进行鉴定,冻存等操作,将其作为软骨组织工程研究的种子细胞,实验分组为脐带间充质干细胞无支架成软骨培养、含细胞的非磁性支架成软骨培养、含细胞的磁性支架成软骨培养、外加静磁场的磁性支架成软骨培养。分别于3天、7天、14天、21天对各个组取样进行糖胺聚糖的定量检测,以及24天的组织进行HE及阿利新蓝染色,然后进行数据分析和研究。结果:脐带来源间充质干细胞在成软骨诱导培养后其形态也发生变化,由长梭状逐渐成多角形,共培养第21天,各组标本HE染色无明显差异;阿利新蓝染色显示各组标本均被蓝染;糖胺聚糖定量测量各个实验组随时间推移程递增状态,其中外加静磁场的含细胞磁性细胞支架样本较其他组升高明显,差异有统计学意义。结论:人脐带间充质干细胞无论有无支架的干预,在体外都可以进行成软骨诱导分化,但是外加静磁场的5%磁性纤维蛋白-琼脂糖复合支架（5%MFAH）与无支架（Cell）、非磁性支架（NFAH）以及无静磁场的5%磁性纤维蛋白-琼脂糖复合支架（5%MFAH）相比,成软骨效率更高,更适合用于软骨组织工程研究。
霍铱萍[4]（2020）在《中国东南沿海球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）形态、分子及生活史特征的研究》文中进行了进一步梳理近年来,中国东南沿海频繁发生球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）藻华,严重危害沿海生态系统和海水养殖安全,甚至由于球形棕囊藻囊体堵塞核电站冷凝水系统,造成核电安全隐患。关于中国东南沿海球形棕囊藻的形态和分子特征的研究仍然较缺乏,其起源问题仍存在争议。球形棕囊藻的分类学和生活史研究中仍存在诸多问题有待解决。因此,本文选取广东汕头（SC1）、海南（SC2）、广东珠海（SC3）、广西（SC4）、广东茂名（SC5）、广东湛江（SC6）、福建（EC7）和墨西哥湾流海域（CCMP629）的8个具有代表性的球形棕囊藻地理株系为研究对象,进行该种的形态特征研究、系统发育学分析以及生活史过程的研究,并与其它地理株系进行比较。通过光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察发现,本文研究的8个株系在形态上都基本符合球形棕囊藻的特征,8个株系中都观察到三种类型的细胞:小型鞭毛细胞、大型鞭毛细胞和囊体细胞,但这8个株系在相同类型细胞的鞭毛长度、细胞大小及小型鞭毛的分泌物有无和胞外附属物等性状中存在差异,表明中国东南沿海球形棕囊藻形态具有多样性。与欧洲沿海球形棕囊藻株系形态相比,这8个株系具有以下特征:小型鞭毛细胞和大型鞭毛细胞两根鞭毛稍不等长（比值为1.1-1.5）;株系SC5和SC6小型鞭毛细胞鳞片上覆盖圆环形丝状物物质,另外6个株系中未观察到鳞片;除株系SC4和EC7外,另外6个株系囊体细胞较小。尽管这些特征并不稳定,但也暗示中国东南沿海球形棕囊藻株系与欧洲沿海株系存在的差异。球形棕囊藻的小型鞭毛细胞定鞭体与鞭毛长度比值相对稳定,区别于棕囊藻属的其它物种,可作为棕囊藻属分类鉴定的参考特征。本文利用核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基（rbc L）、核糖体16S、18S、ITS1的DNA序列对本研究中的8个株系和从Gen Bank引用序列进行系统发育分析。结果证明这8个株系属于球形棕囊藻。棕囊藻rbc L和16S序列相对比较保守,但有鉴定物种的潜力;ITS1序列非常高变,同一株系中也出现多个ITS1序列拷贝;18S r DNA序列对棕囊藻属下物种的鉴定较合适。18S和ITS1 r DNA序列系统发育分析结果表明球形棕囊藻是一个复合种,至少存在暖水亚型和冷水亚型;暖水型株系ITS1序列的多态性暗示隐存种仍然能杂交,中国东南沿海球形棕囊藻株系可能是复合种群,由多个地理株系杂交形成。本文通过光学显微镜、扫描电镜观察以及流式细胞术检测细胞周期,对中国东南沿海球形棕囊藻的生活史过程进行了研究。结果表明,中国东南沿海球形棕囊藻的生活史过程与已报道的球形棕囊藻生活史过程基本相符,但也观察到更多的阶段。中国东南沿海球形棕囊藻能以多个途径形成囊体,有利于生活史中囊体阶段形成绝对优势。此外,本文研究记录了囊体细胞向大型鞭毛细胞、小型鞭毛细胞的转换,小型鞭毛细胞的分裂,以及不动细胞附着在窄隙角毛藻表面形成的聚集体（aggregates,AAs）。在球形棕囊藻中,这种聚集体和囊体细胞的减数分裂首次以显微照片的形式记录。流式细胞术结果表明大型鞭毛细胞与囊体细胞均为二倍体,可能还存在单倍体的小型鞭毛细胞,本研究的8个株系的绝大多数游离单细胞为二倍体。综上,本文研究了关于中国东南沿海球形棕囊藻的详细的形态、分子和生活史的特征,研究结果丰富了球形棕囊藻生活史全貌,反映了中国东南沿海球形棕囊藻株系与欧洲沿海株系在形态和分子特征上的差异,提供了球形棕囊藻的隐存种信息。本研究为棕囊藻属的分类学及藻华成因的研究提供了参考资料,并为藻华的监测、治理提供科学理论基础。
刘莹[5]（2020）在《阴道菌群特点及差异细菌生物膜促进宫颈癌变的机制研究》文中研究指明[目 的]高危型人乳头瘤病毒（High risk human papillomavirus,HR-HPV）感染是宫颈癌的病因,但是并非所有的感染者都会患宫颈癌。多数感染者,病毒会被自身的免疫系统清除,只有持续感染才会发展成宫颈癌。机体清除HPV的能力极易受到阴道微生态的影响。阴道菌群失调作为主要的协同因素,促使HR-HPV长期感染宫颈并最终导致癌变。本研究对从HR-HPV初次感染宫颈,到发展为宫颈癌过程中的不同阶段的阴道菌群进行检测,获得总的菌群信息。研究阴道菌群变化与HR-HPV感染和宫颈癌之间的关系,目的在于阐明阴道菌群在宫颈癌发生、发展过程中的变化特点,并寻找最可能的差异细菌进一步研究。为宫颈癌的防治寻找新的思路。[方法]收集云南省肿瘤医院（昆明医科大学第三附属医院）2017年12月-2018年12月符合入组标准的90例女性阴道分泌物拭子,单纯HR-HPV感染30例,HR-HPV感染并诊断为宫颈上皮内瘤变患者（Cervical intraepithelial neoplasia,CIN）30例,HR-HPV感染并诊断为宫颈鳞状细胞癌Ib1期患者30例。同时选取同期在妇科门诊体检的健康女性30例,HR-HPV均为阴性。提取阴道分泌物总DNA进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学分析和统计学处理。从HR-HPV感染状态和宫颈病变程度两方面分析阴道菌群的结构差异和变化特点,并最终筛选出最可能的差异细菌进一步研究。[结 果]◆健康女性、HR-HPV（+）女性阴道菌群中乳酸杆菌占绝对优势（丰度>50%）。HR-HPV（+）女性乳酸杆菌在门、纲、目、科水平上较正常女性丰度有所下降,但是未出现统计学差异（P>0.05）;两组样本的菌群分布在门、纲、目、科、属、种六个水平上均具有统计学差异（P<0.05）;◆菌群多样性分析发现:健康女性、HR-HPV（+）女性的chao指数和ace指数相当,差异无统计学意义（P>0.05）,说明两组样本中总的菌群数量一样多。HR-HPV（+）女性shannon指数明显高于健康女性（P<0.05）,simpson指数明显低于健康女性（P<0.05）。说明HPV（+）女性阴道菌群结构组成具有明显多样性、复杂性和不均匀性;◆单纯HR-HPV（+）、宫颈癌前病变、宫颈癌患者阴道菌群均以乳酸杆菌占绝对优势（丰度>50%）。随着疾病的进展,乳酸杆菌丰度有所下降,但是未出现统计学差异（P>0.05）;三组样本菌群构成在门、纲、目、科、属、种六个水平上明显不同,差异具有统计学意义（P<0.05）;◆菌群多样性分析发现:单纯HR-HPV（+）、宫颈癌前病变、宫颈癌患者阴道菌群的chao指数、ace指数差别无统计学意义（P>0.05）,表明三组样本阴道菌群的丰富度（即数量）相当。shannon指数、simpson指数差异有统计学意义（P<0.05）,表明三组样本菌群多样性存在差异。组内比较发现:单纯HR-HPV感染组与宫颈癌前病变组无论是在丰富度上（chao指数、ace指数）还是在多样性上（shannon指数、simpson指数）均无统计学差异（P>0.05）。说明这两组菌群结构相似,可以归为非癌组。而宫颈癌组与HR-HPV感染组、宫颈癌前病变组比较,在菌群多样性上（shannon指数、simpson指数）具有明显的统计学差异（P<0.05）,并且随着疾病的进展,差异越显着（P<0.05）;◆差异分析发现:阴道加德纳菌是HR-HPV感染和宫颈癌患者阴道菌群中的主要差异细菌（P<0.05）;[结论]乳酸杆菌是女性阴道的绝对优势菌群。阴道菌群结构的变化,特别是菌群多样性、复杂性的增加与HR-HPV感染以及宫颈癌变有关。阴道加德纳菌是HR-HPV感染、宫颈癌患者阴道菌群中的主要差异细菌,是HR-HPV长期感染宫颈并诱发癌变的主要协同因素。[目 的]第一部分研究发现,阴道加德纳菌是HR-HPV感染和宫颈癌患者阴道菌群中的主要差异细菌。研究表明,阴道加德纳菌具有较强的生物膜形成能力,在女性阴道中主要以生物膜形式存在。本部分研究拟于在体外建立阴道加德纳菌生物膜模型,对其成膜规律、形成特点和空间结构进行描述。探讨随女性月经周期,发生规律性变化的雌激素水平对阴道加德纳菌生物膜形成的影响。目的在于阐明阴道加德纳菌生物膜形成特点,为下一步成功提取成熟生物膜建立基础。同时初步探讨雌激素对阴道加德纳菌生物膜形成的影响,为临床治疗阴道加德纳菌感染寻找新的途径。[方法]首先,在体外以96孔板为载体建立阴道加德纳菌生物膜模型。结晶紫半定量法检测生物膜形成量,从而描述其生物膜形成规律。其次,模拟女性体内雌二醇浓度,用含有不同浓度雌二醇（100pmol/L、200pmol/L、400pmol/L、1000pmol/L）的培养基,体外培养阴道加德纳菌生物膜,结晶紫半定量法检测不同浓度雌二醇对阴道加德纳菌生物膜形成的影响。之后,在体外以金属钛片为载体建立阴道加德纳菌生物膜模型,在扫描电镜下观察其空间结构和特点以及不同浓度雌二醇对其空间结构和特点的影响。激光共聚焦显微镜测量不同浓度雌二醇对阴道加德纳菌生物膜形成厚度、活/死菌比例的影响。[结 果]◆阴道加德纳菌12h开始逐渐形成生物膜,24h进入快速生长期,96h生物膜生成量达高峰（P<0.05）,之后不再增加（P>0.05）;◆96h时,阴道加德纳菌生物膜呈现典型的三维立体结构,呈现“蘑菇云”状层叠,中间有大量通道和细胞外基质,至此成熟生物膜己形成;◆不同浓度的雌二醇对阴道加德纳菌生物膜形成具有抑制作用（P<0.05）,随着雌二醇浓度的增加（100pmol/L、200pmol/L、400pmol/L、1000pmol/L）抑制作用逐渐增强（P<0.05）,400pmol/L与1000pmol/L雌二醇浓度的抑制作用相当（P>0.05）,400pmol/L是抑制阴道加德纳菌生物膜形成的最适浓度;◆激光共聚焦显微镜观察,在相同时间点随着雌二醇浓度的增加,阴道加德纳菌生物膜厚度逐渐变薄（P<0.05）。在相同浓度下,随着时间的延长阴道加德纳菌生物膜逐渐变厚（P<0.05）;◆扫描电镜、激光共聚焦显微镜下观察,发现相同时间点时,100pmol/L组的生物膜比200pmol/L的生物膜成熟（P<0.05）、200pmol/L组的比400pmol/L组的成熟（P<0.05）;[结 论]阴道加德纳菌可以在聚乙烯、金属钛表面形成致密的生物膜,但生物膜生长速度较慢,成膜时间较长。雌二醇可以抑制阴道加德纳菌生物膜的形成,抑制作用与作用时间和浓度相关。雌二醇主要通过抑制阴道加德纳菌形成厚度、延缓生物膜形成进程、影响生物膜内部结构而发挥作用的。适当浓度的雌二醇可以作为治疗阴道加德纳菌生物膜感染的可选药物。[目 的]第二部分实验已经成功建立阴道加德纳菌生物膜体外模型,证实了雌二醇对阴道加德纳菌生物膜的形成具有抑制作用。本部分研究拟于在成功建立阴道加德纳菌生物膜体外模型的基础上,提取成熟生物膜。将阴道加德纳菌生物膜与宫颈癌前细胞（H8细胞）共培养,研究阴道加德纳菌生物膜对宫颈癌前细胞的生物学功能和上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transformation,EMT）相关标志物的影响,目的在于探讨阴道加德纳菌生物膜促进宫颈癌变的初步分子机制。同时,研究不同浓度雌激素对宫颈癌前细胞上皮间质转化的影响,为进一步评价雌激素治疗阴道加德纳菌生物膜感染的安全性提供依据。[方 法]首先,在体外成功培养阴道加德纳菌生物膜,并提取成熟生物膜。用含有不同浓度阴道加德纳菌生物膜的培养基体外培养H8细胞,CCK8法检测H8细胞增殖能力,Transwell法检测H8细胞迁移能力。利用RT-PCR、Western-blot方法检测不同浓度阴道加德纳菌生物膜刺激下,H8细胞上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin、Snail、Vimentin的表达情况。将不同浓度的雌二醇（Opmol/L、200pmol/L、400pmol/L、800pmol/L）与 H8 细胞共培养,利用 RT-PCR 法检测H8细胞上皮标志物E-cadherin、间质标物Vimentin的表达情况。[结 果]◆阴道加德纳菌生物膜抑制H8细胞增殖（P<0.05）,对H8细胞迁移无影响（P>0.05）;◆阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞在基因水平上低表达上皮标志物E-cadherin（P<0.05）,高表达间质标志物 N-cadherin、Snail、Vimentin（P<0.05）;◆阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞在蛋白水平上低表达上皮标志物蛋白E-cadherin,高表达间质标志物蛋白 N-cadherin、Snail、Vimentin;◆不同浓度的雌二醇对H8细胞EMT相关标志物的表达无影响（P>0.05）;[结 论]阴道加德纳菌生物膜对宫颈癌前细胞具有一定的细胞毒作用。阴道加德纳菌生物膜通过诱导宫颈癌前细胞发生上皮间质转化而发挥促癌作用。雌二醇不能诱导宫颈癌前细胞发生上皮间质转化,用于治疗阴道加德纳菌生物膜感染具有一定的安全性。[目 的]第三部分研究发现,阴道加德纳菌生物膜是通过诱导宫颈癌前细胞发生EMT而发挥促癌作用。EMT作为诱发细胞癌变的关键步骤已被学术界认可,但是其在阴道加德纳菌生物膜诱导宫颈癌变中的作用机制和信号调控尚不明确。本部分实验在之前建立的“阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞EMT”模型的基础上,进一步研究阴道加德纳菌生物膜诱发EMT的详细信号转导过程,旨在为阴道加德纳菌生物膜作为临床预防和治疗宫颈癌的新靶点提供科学依据。[方法]首先利用免疫荧光法检测阴道加德纳菌生物膜作用后,H8细胞的TLR4、P-Smad2/3蛋白的表达情况,初步探讨其在阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞发生EMT中的变化趋势。利用RT-PCR、Western-blot方法研究TGF-β1/Smad信号通路在阴道加德纳菌生物膜诱导的H8细胞EMT过程中的作用,进一步通过抑制TLR4蛋白的表达,研究TLRU对H8细胞EMT及TGF-β1/Smad信号通路的调控作用。[结 果]◆免疫荧光显示,阴道加德纳菌生物膜上调H8细胞TLR4、P-Smad2/3蛋白的表达;◆在“阴道加德纳菌生物膜诱导的H8细胞EMT”模型中加入0.1ng/ml TGF-βi（EMT阴性对照浓度）,可以显着增强H8细胞的EMT（P<0.01）。提示阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞发生EMT是通过TGF-β1/Smad信号通路发挥作用的;◆在“阴道加德纳菌生物膜+0.1ng/ml TGF-βi”的H8细胞EMT模型中加入TLR4抑制剂,可以逆转H8细胞的EMT（P<0.01）,证实了阴道加德纳菌生物膜诱导H8细胞的EMT是受到TLR4调控的;◆在“阴道加德纳菌生物膜+0.1ng/ml TGF-β1”的H8细胞EMT模型中加入TLR4抑制剂后,p-Smad2/3的表达显着下调,证实了 TGF-β1/Smad是其下游信号通路,受到TLR4调控;[结 论]阴道加德纳菌生物膜是通过TLR4-TGF-β1/Smad信号通路诱导H8细胞发生EMT,是阴道加德纳菌生物膜协同HR-HPV感染人宫颈上皮细胞并促发癌变的主要机制,可以作为预防和治疗宫颈癌的潜在靶点。
杨超[6]（2020）在《负载丁酸钠的多孔磺化聚醚醚酮通过免疫调控加强抗菌和成骨作用的机制研究》文中研究说明迄今为止,人工材料已经广泛地应用到骨科领域并取得了巨大的成功。然而,内植物相关感染和内植物骨整合性能不足依旧是困扰骨科医生和患者的两大术后并发症,并最终可导致骨折的延迟愈合或不愈合,内植物假体的松动和失败等。虽然科研工作者和临床医生为研发一种理想的促成骨和抗菌的人工生物材料做出了大量的努力。但是,我们知道骨愈合和抗菌的过程并不仅仅是某一种细胞或某一系统的单一调控,而是人体多系统、多细胞参与的综合调控的结果。而大量的研究表明,免疫系统与骨折修复和机体抗菌的过程密切相关。因此,骨内植物材料不应只关注于生物材料的直接抗菌和直接成骨作用,还应该密切关注生物材料的免疫调节能力。在本研究中,我们将具有优异力学性能和理想弹性模量的聚醚醚酮（PEEK）材料,通过磺化工艺和水热处理,制备出具有表面三维多孔结构的磺化PEEK材料,再通过浸泡-溶剂挥发法将具有免疫活性功能的丁酸钠负载到多孔磺化聚醚醚酮表面,构建出一种理想的并具有免疫调控能力的生物材料。材料表征方面,我们利用扫描电镜和X射线能谱分析仪检测样品的表面形态和元素分布情况,利用离子释放试验检测丁酸钠的负载和释放;体外抗菌及免疫调控方面,我们利用平板涂布法、扫描电镜以及巨噬细胞吞噬细菌试验等检测负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料的直接抗菌和免疫抗菌能力;体外成骨及免疫调控方面,我们利用流式细胞术、免疫荧光染色、ELISA和RT-PCR检测实验样品表面的巨噬细胞表型变化,再进一步利用条件培养基验证各样品的免疫成骨能力;最后通过大鼠股骨骨髓炎模型和小鼠气囊模型验证各组实验样品的体内抗菌、成骨和免疫调控的能力。实验结果表明,通过磺化工艺和水热处理,可以成功的制备出具有表面多孔结构的磺化PEEK材料,并通过浸泡-溶剂挥发法成功的将不同浓度的丁酸钠负载到多孔磺化PEEK表面。进一步体外实验表明,当细菌存在时,负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料可增强巨噬细胞的吞噬功能,加强生物材料对周围细菌的清除;当细菌不存在时,进而调控巨噬细胞的极化状态,促进巨噬细胞向M2表型分化,分泌产生抗炎因子和促成骨生成因子等,达到加强间充质干细胞成骨分化的作用。体内动物实验结果同样表明,负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料具有优良的抗菌、成骨和免疫调控的能力。本项研究表明,负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料可通过免疫调控加强生物材料的抗菌和成骨能力。因此,加强生物材料的免疫调控能力可作为一种新的思路和方法以增强骨内植物材料本身的抗菌性和成骨性。
张冬英[7]（2020）在《儿茶酚功能化壳聚糖/牡蛎肽温敏水凝胶的制备及其性能研究》文中进行了进一步梳理创伤是现代社会最常见的一种疾病,具有很高的发病率和致残率,迄今为止,各种原因导致的出血、皮肤创伤依然严重威胁着人类的健康和生活质量。我国海洋生物资源丰富,开发海洋生物资源为新型生物医用材料是推动海洋经济快速发展重要途径,具有重大的科学意义、经济价值和社会效益。本论文以壳聚糖（CS）为原料合成儿茶酚功能化壳聚糖（CS-C）,然后以β-甘油磷酸钠（β-GP）为温敏剂与海洋活性肽复合制备具有止血和创伤修复效果的温敏水凝胶。主要研究内容和结果如下:1.通过偶联反应,将3,4-二羟基苯丙酸（HCA）接枝到CS主链上,合成儿茶酚功能化壳聚糖（CS-C）,采用紫外光谱、红外光谱和核磁共振谱等表征CS-C的化学结构,确定CS-C接枝成功,其接枝率为17.3%。对CS-C的水溶性、热稳定性、抗氧化能力进行研究,结果表明CS-C的水溶解度达5 g/100 m L以上,热稳定性良好,CS-C浓度在35μg/m L时DPPH自由基清除率达92.8%,浓度在1.5 mg/m L时,羟自由基清除率达到97.4%。细胞增殖活力、细胞凋亡和红细胞溶血实验结果表明CS-C无细胞毒性,溶血率低于国家标准,具有良好的生物相容性。2.通过构建CS-C/β-GP温敏水凝胶,并对该水凝胶进行表征。CS-C（2%）与β-GP（30%）以8:2体积比混合,在37℃下16 min内凝胶化。SEM观察冻干水凝胶呈现出多孔网状结构,有利于水及小分子药物自由通过,可用于止血、伤口愈合、药物释放等。3.对牡蛎肽（OP）进行分析,并通过乳化交联法制备壳聚糖/牡蛎肽微球（CSMO）。结果表明OP分子量在1000 Da以下的占95.48%,水溶性好,制备的CSMO球形完整,粒径主要集中在1-10μm,包封率72.8%,上载率11.9%,缓释效果好。4.通过构建CS-C/β-GP、CS-C/OP/β-GP和CS-C/CSMO/β-GP温敏水凝胶,测试其物理性能,并对细胞生物学的影响进行了研究。结果表明,CS-C/β-GP、CS-C/OP/β-GP和CS-C/CSMO/β-GP水凝胶具有孔径大小均匀的多孔结构,吸水率都在550%之上,能够保持伤口湿润的微环境;细胞实验结果表明三种水凝胶对L929细胞无明显细胞毒性,CS-C/CSMO/β-GP、CS-C/OP/β-GP在48 h内的细胞迁移率达到90%以上,与空白对照组对比有显着性差异,表明水凝胶具有促进L929细胞迁移的作用;在1000μg/m L的浓度下,水凝胶的溶血率都低于5%,材料安全。5.通过建立止血以及皮肤创伤修复模型,研究水凝胶对止血、创伤修复的作用。全血凝血指数、体外凝血时间、血小板粘附、红细胞吸附等结果表明水凝胶能够促进凝血;小鼠肝脏、断尾止血模型实验表明水凝胶能加速止血,与市售的明胶海绵止血效果相当;在皮肤创伤修复周期中,观察皮肤病理变化,检测组织中总蛋白、TNF-α和IL-6的含量,免疫组化分析Ki-67、VEGF表达,结果表明水凝胶可以减轻创面伤口处多种炎症细胞聚集,加速胶原纤维和新血管的生成,促进肉芽组织中总蛋白的合成,上调创面中Ki-67和VEGF的表达,促进创面愈合。
杨傲飞[8]（2020）在《基于肾主骨生髓理论研究淫羊藿苷调控外泌体内miR-122-5p对BMSCs成骨、迁移的作用及机制》文中指出第一部分兔骨髓间充质干细胞的提取、鉴定及培养目的:从成年兔的四肢骨中分离提取骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）,并进行传代培养,同时对骨髓间充质干细胞进行鉴定,为后续实验提供实验细胞。方法:通过Percoll密度梯度分离法提取并扩增培养BMSCs,并通过流式细胞仪、成骨及成脂分化诱导培养基对BMSCs进行鉴定。结果:BMSCs原代及传代细胞状态良好,流式细胞仪、成骨及成脂分化诱导鉴定表明分离提取的BMSCs具有BMSCs特有的特征,说明分离提取成功。结论:实验所分离提取的兔四肢骨内的细胞鉴定为BMSCs,可用于后续实验研究。第二部分兔成骨细胞的提取、鉴定及培养目的:从成年兔的四肢骨膜中分离提取成骨细胞（osteoblasts,OB）,并进行传代培养,同时对OB进行鉴定,为后续实验提供实验细胞。方法:采用骨膜源性的方法提取OB并扩增培养OB,通过吉萨姆染色、茜素红染色、扫描电镜对OB进行鉴定。结果:OB原代及传代细胞状态良好,吉萨姆染色、茜素红染色、扫描电镜对OB细胞进行鉴定,结果表明分离提取的OB细胞具有相应特性,说明分离提取成功。结论:实验所分离提取的兔四肢骨膜的细胞鉴定为OB细胞,可用于后续实验研究。第三部分淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞成骨、迁移作用的最佳浓度及时间规律目的:验证淫羊藿苷（Icariin,ICA）能促进BMSCs的成骨分化和迁移的发生,寻找其发挥作用的最佳浓度和时间规律,以及发挥作用的信号通路。方法:实验过程大致分5个部分,分述如下:（1）用CCK-8试剂盒检测不同浓度的ICA对BMSCs活性和增殖的影响。（2）观察不同浓度ICA作用于BMSCs后形成的矿化结节情况。（3）观察3d、7d,ICA作用于BMSCs后成骨分化和迁移的m RNA、蛋白表达。（4）观察ICA作用于BMSCs后成骨、迁移表达的时间规律。（5）用si-Runx2、AMD3100验证ICA促进BMSCs成骨分化和迁移的信号通路。结果:（1）ICA浓度为1×10-7M、1×10-8M两个组有促进细胞增殖的作用。（2）ICA浓度为1×10-7M组的矿化效果最佳。（3）浓度为1×10-7M ICA作用于BMSCs促进其成骨、迁移的m RNA和蛋白表达量最高。（4）ICA作用下的BMSCs,在第3-4d时,成骨、迁移表达量达到第一个高峰,第7d时达到第二个高峰。（5）si-Runx2、AMD3100均能有效地抑制ICA促进成骨分化和迁移发生的作用。结论:ICA能明确促进BMSCs的成骨分化和迁移的发生,这两者是相伴进行的。ICA发挥作用的最佳浓度是1×10-7M,它是通过Runx2信号轴和CXCR4信号轴分别发挥成骨和迁移作用。ICA促进BMSCs成骨分化和迁移的发生存在时间规律。第四部分成骨细胞源性外泌体的提取及鉴定目的:复苏冻存的OB细胞进行传代并扩增培养,提取OB源性外泌体,进行相关鉴定,为后续实验提供材料。方法:将复苏后的成骨细胞常规培养,然后进行扩大培养,收集细胞上清液。通过两种方法（一是试剂盒,二是超速离心）提取OB细胞的外泌体,用透射电镜和Western blotting检测进行鉴定。结果:扩增培养的OB原代及传代细胞状态良好,透射电镜观察到外泌体的典型形态,Western blotting对OB源性外泌体进行Tsg101、Hsp70、CD63等外泌体标志性指标的检测,发现超离组和试剂盒组的上述指标性蛋白表达量明显高于空白组。结论:成功从OB细胞上清中分离提取到外泌体,超速离心和试剂盒,这两种方法所提OB源性外泌体可用于后续实验研究。第五部分淫羊藿苷联合成骨细胞源性外泌体对骨髓间充质干细胞成骨、迁移的作用目的:验证ICA联合成骨细胞源性外泌体（OB-exosome,OB-exo）对BMSCs具有明确的促进其成骨分化和迁移发生的作用。方法:分四个组,分别是空白组,ICA组、OB-exo组、ICA+OB-exo组,进行连续培养。于第3d,收集BMSCs,检测各组的成骨、迁移各目标m RNA、蛋白的表达情况。结果:通过q PCR、Western blotting检测发现,ICA组、OB-exo组、ICA+OB-exo组,三个组相比空白组均有明显升高,其中ICA+OB-exo组最高。结论:ICA联合OB-exo对BMSCs具有明确的促进其成骨分化和迁移发生的作用。第六部分成骨细胞源性外泌体的高通量测序及miRNAs分析目的:鉴定成骨细胞源性外泌体的成分,预测靶点miRNAs,为后续实验验证做参考。方法:将复苏后的成骨细胞常规培养,并进行扩大培养,收集细胞上清液,采用超速离心法提取外泌体,进行高通量测序。运用相关软件对所检测结果进行分析。结果:外泌体中含有mi RNA总量占全部成分的17.47%,通过软件对mi RNA的靶基因进行预测,找到相关目标mi RNA为mi R-122-5p。结论:预测mi R-122-5p与成骨分化、迁移等生物学作用密切相关,将mi R-122-5p作为后续研究的参考。第七部分淫羊藿苷调控成骨细胞源性外泌体mi R-122-5p对骨髓间充质干细胞成骨、迁移作用目的:验证ICA调控OB-exo对BMSCs发挥作用的靶点mi RNA是mi R-122-5p。方法:实验过程大致分2个部分,分述如下:（1）四个组（mi R-122-5p minic NC组、mi R-122-5p minic组、mi R-122-5p minic NC+ICA组、mi R-122-5p minic+ICA组）,作用于BMSCs,连续培养3d,检测BMSCs的成骨和迁移表达情况。（2）四个组（mi R-122-5p inhibitor NC组、mi R-122-5p inhibitor组、mi R-122-5p inhibitor NC+ICA组、mi R-122-5p inhibitor+ICA组）,作用于BMSCs,连续培养3d,检测BMSCs的成骨和迁移表达情况。结果:（1）mi R-122-5p minic+ICA组在各项成骨、迁移m RNA和蛋白的表达量中最高。（2）mi R-122-5p inhibitor+ICA组在各项成骨、迁移m RNA和蛋白的表达量中降低。结论:ICA是通过调控OB-exo中的mi R-122-5p发挥作用的。
封国超[9]（2020）在《灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的研究》文中认为背景:严重创伤、感染以及骨肿瘤切除后常导致严重的骨组织缺损,特别是大段骨缺损,不仅增加治疗难度,且容易致残、后期治疗困难。修复大段骨缺损并重建其功能一直是骨科难题及研究热点。目前临床上治疗大段骨缺损多采用自体骨和异体骨。带血管自体骨移植修复大段骨缺损,手术操作复杂,患者手术负担重,况且自体骨毕竟有限。异体骨虽来源广泛,但存在免疫排斥及传播疾病的危险。随着骨组织工程快速发展,组织工程骨有可能成为修复大段骨缺损较理想的方式。组织工程骨以其来源充足、生物功能与自体骨相似或更优,在骨缺损的修复中显示出前所未有的优越性。骨组织工程的研究是将种子细胞与骨支架材料复合后置于预先设计好的生物反应器内,待其完成血管化以及成骨之后,将其移植入体内骨缺损处,进行缺损组织的再生修复。本课题分为三部分:（1）采用可溶聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）球模注浆技术制备可降解连通多孔生物陶瓷人工骨材料（即β-磷酸三钙,β-tricalcium phosphate,β-TCP）,检测其性能表征;（2）采用全骨髓贴壁法从兔骨髓中提取、培养骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）,并进行传代及鉴定,将其作为种子细胞;（3）以灌注型生物反应器为载体,将BMSCs接种于β-TCP形成细胞/材料复合物,通过不同灌注流速对细胞/材料复合物进行灌注培养,评估其对BMSCs增殖及成骨分化的影响。第一部分可降解连通多孔生物陶瓷人工骨材料的制备及性能表征目的:制备并检测可降解多孔β-TCP支架材料的理化性能,优化人工骨材料的制备规格,研究人工骨材料在体外的理化性能,评估其应用于骨组织工程生物材料的可行性。方法:（1）利用扫描电镜观察多孔β-TCP支架材料表面及内部形态;（2）利用扫描电镜测量材料实际孔径、孔内连通径数值;（3）利用X射线能谱仪对多孔β-TCP支架材料表面、横断面、纵切面元素进行分析;（4）利用接触角测量仪对多个多孔β-TCP支架材料表面、横切面、纵切面的接触角进行检测;（5）利用电子万能材料力学试验机对多孔β-TCP支架材料进行抗压强度测定;（6）利用重量体积法及Archimedes排水法计算多孔β-TCP支架材料的孔隙率等,并计算吸水率。结果:多孔β-TCP支架材料孔径均匀,孔径大小波动在500μm左右,各孔隙相互连通,连通径大小120μm左右,孔隙率大于60%,支架表面微结构粗糙呈颗粒状,凹凸不平,属于弱疏水性材料,各支架间吸水性较均一,Ca/P比=1/0.67与天然骨接近,生物力学结果显示多孔β-TCP支架材料与天然松质骨类似。结论:采用可溶聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）球模注浆技术制备可降解连通多孔生物陶瓷人工骨材料性能表征良好,多项指标接近天然骨,完全符合骨组织工程材料对孔径、孔隙率及力学性能的要求,可作为构建组织工程骨研究理想生物材料。第二部分骨髓间充质干细胞的提取、培养、传代及鉴定目的:将BMSCs作为骨组织工程的种子细胞,对其进行提取、培养、传代及鉴定,以评估其纯度及鉴定其向成骨和成脂肪分化的能力。方法:采用全骨髓贴壁法将从新西兰白兔股骨及胫骨骨髓腔提取的骨髓进行分离并提纯BMSCs。观察BMSCs形态及生长方式,用成骨成及脂肪诱导试剂盒对其分别进行成骨及成脂肪定向诱导分化,用茜素红及油红对其染色并检测BMSCs多向分化的能力,并通过流式细胞仪检测其表面标志物CD29、CD34、CD44、CD45、CD90的表达情况。结果:全骨髓贴壁法进行BMSCs提取及培养过程方便快捷。显微镜下BMSCs为长梭形,贴壁牢,呈旋涡状、鱼群状或放射状生长。成骨诱导3周后茜素红染色可见钙化结节,成脂诱导2周后油红染色可见胞质内充满类圆形脂滴。BMSCs表面标志物结果:CD29+、CD44+、CD90+、CD34-、CD45-。结论:全骨髓贴壁法提取、分离、培养的BMSCs增殖优良、形态好,且具有成骨、成脂肪等多向分化能力,为骨组织工程理想的种子细胞。第三部分灌注型生物反应器的设计与构建及灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的影响目的:设计及构建灌注型生物反应器,评估其灌注流速的稳定性及可靠性;利用灌注型生物反应器不同流速对细胞/材料复合物进行培养,观察不同灌注流速下β-TCP内BMSCs的形态、增殖及成骨分化的情况,同时对不同灌注流速进行评价,从而筛选最佳灌注流速,为体内生物反应器的设计及组织工程骨的培养提供理论参数。方法:（1）接种后灌注培养1、4、7天后利用细胞增殖及毒性检测试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）检测不同组间细胞增殖及生物相容性;（2）接种后灌注培养7天利用电子扫描电镜（scanning electron microscopy,SEM）观察不同组间细胞形态;（3）接种后灌注培养7天利用台盼蓝染色法计算不同组间人工骨材料上细胞的存活率;（4）接种后灌注培养7天利用碱性磷酸酶试剂盒测定不同组间人工骨材料上细胞的碱性磷酸酶活力;（5）接种后灌注培养7d、10d后利用实时定量RT-PCR检测不同组间诱导成骨效应;（6）接种后灌注培养7d通过Western blot检测技术检测不同组间成骨相关蛋白表达量。结果:各组CCK-8结果显示在培养第4d和7d时,0.01ml/min灌注流速组细胞增殖快于其他组（P<0.05）,细胞出现增殖趋势说明细胞与材料生物相容性较好。扫描电镜观察发现静态培养组（0ml/min）细胞分布稀疏,呈疏松的簇状生长;0.01ml/min灌注流速组呈膜片状聚集生长,并且多数细胞伸出伪足分布在连通孔周围;0.05ml/min灌注流速组部分呈膜片状生长;0.1ml/min多数呈膜片状生长。细胞存活率检测0.01ml/min灌注流速组存活率最高。0.01ml/min灌注流速组成骨相关基因（Runx2、ALP、OPN、Col-I）及成骨相关蛋白（Runx2、OPN、Col-I）的表达水平都明显高于其它组（P<0.05）,同样观察到0.01ml/min灌注流速组碱性磷酸酶活性最高。结论:β-TCP材料可诱导BMSCs向成骨分化,随生物反应器灌注流速的降低,可促进细胞外基质的合成和分布,并可增加成骨相关基因及相关蛋白的表达。其中0.01ml/min低灌注流速最有利于BMSCs的增殖及向成骨分化。
王丽[10]（2020）在《一种新型自愈性水凝胶负载外泌体促进骨再生作用研究》文中研究表明口腔种植义齿追溯其起源已有上千年历史,随着种植体设计的不断革新、外科技术的不断成熟以及人们生活水平和口腔保健意识的不断提高,近来口腔种植义齿已成为口腔常见修复技术。种植义齿的成功率取决于种植体与骨界面之间的良好整合过程,而该过程则需要种植区有足够的牙槽骨骨量。但在临床工作中,常见由于先天发育不足、外伤、肿瘤或拔牙后牙槽骨吸收、萎缩等原因造成种植区骨量不足,而无法满足种植手术适应症的患者。如何解决种植区的骨量不足问题,一直是口腔种植领域关注的焦点。大量研究表明间充质干细胞（MSCs）在促进骨再生方面具有显着的作用效果,但MSCs在维持生物活性、生物活性物质定量以及安全性等方面存在众多问题。因此,寻找具有相似功效的无细胞疗法成为当前研究热点,在国内外学者的进一步研究中发现,MSCs治疗的巨大价值是通过旁分泌因子实现的,而外泌体是细胞旁分泌的主要体现方式,且几乎保留了MSCs的所有优势,无需担心MSCs的并发症,显示出广阔的应用前景。应用外泌体等功能活性物质修复受损组织尚需解决生物载体问题,即如何使外泌体有效地聚集在组织缺损处持续发挥作用。水凝胶是以水为介质的三维网络交联结构,水凝胶具有卓越的生物相容性以及组织相似性,在生物医用材料中广泛应用,但传统水凝胶如明胶、纤维蛋白胶、透明质酸等,在复杂的生理环境下,很容易因机械形变而产生破损,影响其力学性能,以及缓释作用。与传统水凝胶相比,自愈性水凝胶赋予了水凝胶自愈合性能,破损的水凝胶能够在短时间内进行自我修复,这将增强材料的使用寿命、安全性以及缓释作用。先前基于亚胺键的壳聚糖基多响应性自愈性水凝胶已被广泛研究,作为凝胶因子的双端苯甲醛基封端的遥爪聚乙二醇（DF-PEG）与聚乙二醇壳聚糖（GCS）溶液混合后,可以在短时间内形成亚胺键制备得到自愈性水凝胶,考虑到骨移植材料的特殊要求,我们对该自愈性水凝胶进行改性,在壳聚糖基自愈性水凝胶的基础上添加了与骨无机成分相似的且具有高生物活性、良好生物相容性的珊瑚源羟基磷灰石（CHA）以及与CHA具有高度亲和力的且在骨组织工程广泛应用的丝素（SF）材料。使的材料与材料之间形成优势互补以满足骨移植材料所需的理化性能和生物活性。通过体内外实验,对人脐带间充质干细胞（hucMSCs）源外泌体（hucMSC-Exos）与自愈性水凝胶复合材料对骨再生作用进行了较为充分的研究,以期为解决临床种植区骨量不足提供新的技术策略和方法。本实验主要分为以下四个部分进行。第一部分提取并鉴定人脐带间充质干细胞源外泌体目的:体外从人脐带组织中分离、培养hucMSCs,提取鉴定hucMSC-Exos,为后续实验奠定基础。方法:组织块贴壁法从人脐带组织中分离培养hucMSCs,并对细胞形态、细胞表面特征性标记物以及多向分化潜能进行检测。收集hucMSCs培养上清液,采用低温超高速离心法收集hucMSC-Exos,通过透射电镜（TEM）鉴定外泌体的大小和形态,Western Blot鉴定外泌体表面的特征性标志物CD9、CD63。结果:成功提取hucMSCs,呈现旋涡状贴壁式生长,形态呈长梭形,具有多向诱导分化潜能,hucMSCs细胞强表达CD44、CD73,极低表达CD45、CD31。Huc MSCs来源的外泌体呈圆形、椭圆形,大小集中在80 nm左右,阳性表达CD9,CD63。结论:本部分实验成功的提取了hucMSCs及其来源外泌体,为后续实验提供可靠稳定的移植源。第二部分hucMSC-Exos对前成骨细胞及人脐静脉血管内皮细胞生物学行为的影响目的:检测hucMSC-Exos对小鼠成骨前体细胞（m OPCs）及人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）生物学行为的影响。方法:采用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测不同浓度梯度hucMSC-Exos对m OPCs增殖的影响。通过碱性磷酸酶活性检测以及茜素红染色观察不同浓度梯度hucMSC-Exos对m OPCs成骨分化作用的影响。采用CCK8试剂盒和细胞划痕实验检测不同浓度梯度hu MSC-Exos对HUVECs增殖和迁移的影响。结果:1.CCK8法结果显示25μg/ml、50μg/ml的hucMSC-Exos可以显着的促进m OPC在体外的增殖（P<0.05）,碱性磷酸酶和茜素红染色结果发现25μg/ml和50μg/ml的hucMSC-Exos组可以明显提高了m OPCs碱性磷酸酶活性及钙化结节的形成,且50μg/ml的外泌体浓度作用强于25μg/ml（P<0.05）。2.CCK8和细胞划痕实验结果显示25μg/ml与50μg/ml的hu MSC-Exos组可以明显的促进HUVECs的体外增殖和迁移,且呈现浓度依赖效应,各组间均有统计学差异（P<0.05）。结论:1、hucMSC-Exos以浓度依赖的方式促进m OPCs的增殖与成骨分化。2、huMSC-Exos能有效促进HUVECs的增殖、迁移。第三部分珊瑚来源羟基磷灰石/丝素/乙二醇壳聚糖/DF-PEG水凝胶的制备与表征目的:制备并评估一种以DF-PEG作为凝胶因子以CHA、SF、GCS为基体材料的新型自愈性水凝胶材料作为医用材料的可行性。方法:室温下将DF-PEG作为凝胶因子与CHA/SF/GCS的水溶液进行混合,60s内迅速形成CHA/SF/GCS/DF-PEG水凝胶。通过扫描电镜（SEM）、傅里叶红外光谱（FT-IR）、X射线衍射（XRD）以及接触角和自愈性实验对CHA/SF/GCS/DF-PEG水凝胶的结构和理化特性进行表征。接种m OPCs对水凝胶材料的细胞毒性和细胞相容性进行评价。结果:CHA/SF/GCS/DF-PEG水凝胶孔隙大小一致、形态规则、孔隙间具有良好的连通性且孔壁厚度均匀、表面光滑。FT-IR及XRD结果表明成功的制备了珊瑚源羟基磷灰石,FT-IR结果显示合成水凝胶可见明显的亚胺键与磷酸基团的吸收峰。MTT结果显示水凝胶无毒,包封于水凝胶中的m OPCs存活和增殖状态良好3 d时细胞存活率仍在90%以上,增殖率高达95%,具有良好的细胞相容性。结论:成功地制备了自愈性CHA/SF/GCS/DF-PEG水凝胶,该水凝胶综合性能优异,有望成为一种新型医用水凝胶材料。第四部分:hucMSC-Exos联合CHA/SF/CGS/DF-PEG水凝胶对大鼠股骨髁缺损修复作用评价目的:建立大鼠股骨髁缺损模型,将hucMSC-Exos负载于CHA/SF/CGS/DF-PEG水凝胶内,评价其对骨缺损修复作用。方法:54只SD大鼠构建股骨髁缺损模型,随机分为3组,PBS修复组（Control组）;单纯的CHA/SF/CGS/DF-PEG水凝胶修复组（Hydrogel组）;添加hucMSC-Exos的CHA/SF/CGS/DF-PEG水凝胶的修复组（Hydrogel-exosomes组）。通过大体观察、X线片、micro-CT检测,组织切片染色,评估比较术后30 d、60 d、90 d的骨愈合情况。结果:通过大体观察、X线片、micro-CT检测,组织切片染色结果显示,Hydrogel-exosomes组骨愈合率高于其他两组,差异具有统计学意义（P<0.05）。Hydrogel组骨愈合率高于空白对照组,差距亦具有统计学意义（P<0.05）结论:CHA/SF/CGS/DF-PEG水凝胶具有骨修复效果,添加hucMSC-Exos后骨修复效果更加显着。
二、细胞融合的扫描电镜初步观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、细胞融合的扫描电镜初步观察（论文提纲范文）
（1）羟基磷灰石涂层材料的生物安全性及有效性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 3D打印技术介绍 |
| 1.1.1 熔融沉积成型技术 |
| 1.1.2 光固化立体造型术 |
| 1.1.3 选择性激光烧结技术(SLS) |
| 1.1.4 生物打印 |
| 1.2 3D打印技术在医疗器械中的应用 |
| 1.2.1 体外医疗器械制造,即无需生物相容性的材料 |
| 1.2.2 个性化永久植入假体 |
| 1.3 3D打印材料 |
| 1.3.1 3D打印钛合金材料 |
| 1.3.2 3D打印涂层材料 |
| 1.4 选题的目的和意义 |
| 2 HA涂层对材料细胞相容性的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.3 结论 |
| 3 HA 涂层对材料致癌性的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 Bhas42 细胞生长曲线测定结果 |
| 3.2.2 细胞生长试验结果 |
| 3.3 结论 |
| 4 HA 涂层对材料生物安全性的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 细胞毒性试验 |
| 4.2.2 刺激试验 |
| 4.2.3 急性毒性试验 |
| 4.2.4 溶血试验 |
| 4.2.5 回复突变试验 |
| 4.2.6 小鼠淋巴瘤试验 |
| 4.3 结论 |
| 5 HA 涂层对材料体内骨整合能力的影响 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 实验方法 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.3 结论 |
| 6 总结与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（2）溶藻菌筛选、复合菌剂制备及在养殖尾水中的应用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 水体富营养化现状及危害 |
| 1.1.1 水体富营养化现状 |
| 1.1.2 形成水体富营养化的原因 |
| 1.1.3 水体富营养化危害 |
| 1.2 水体富营养化治理方法 |
| 1.2.1 物理方法 |
| 1.2.2 化学法 |
| 1.2.3 生物法 |
| 1.3 微生物控藻研究进展 |
| 1.3.1 溶藻微生物分类及特性 |
| 1.3.2 溶藻产物分析 |
| 1.4 微生物反应动力学 |
| 1.5 细胞融合技术 |
| 1.6 潜流湿地 |
| 1.7 研究目的与意义 |
| 1.8 研究内容与技术路线 |
| 1.8.1 研究内容 |
| 1.8.2 技术路线 |
| 2 溶藻菌R_1的筛选及其特性研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验样品与培养基 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 溶藻菌的分离与纯化 |
| 2.3.2 高效溶藻细菌的筛选 |
| 2.3.3 溶藻计算方式 |
| 2.3.4 R_1菌生理生化鉴定与16S rDNA测序 |
| 2.3.5 R_1菌溶藻特性研究 |
| 2.3.6 R_1菌溶藻前后毒性研究 |
| 2.4 实验结果与讨论 |
| 2.4.1 菌株形态 |
| 2.4.2 R_1菌生理生化及分子鉴定 |
| 2.4.3 菌、藻液体积比对溶藻效果的影响 |
| 2.4.4 初始藻浓度对溶藻效果的影响 |
| 2.4.5 溶藻前后菌液的急性毒性实验 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 铜绿微囊藻溶藻进程与叶绿素a降解动力学研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验样品、培养基及仪器 |
| 3.2.2 溶藻计算方式 |
| 3.2.3 生长曲线测定 |
| 3.2.4 溶藻方式初步测定 |
| 3.2.5 红外光谱分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 R_1菌生长曲线 |
| 3.3.2 R_1菌生长动力学 |
| 3.3.3 溶藻过程动力学分析 |
| 3.3.4 溶藻方式初步测定 |
| 3.3.5 溶藻产物的红外光谱分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 双效工程菌XR_1的构建及菌剂效能研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.2.1 菌、藻来源 |
| 4.2.2 试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 R_1菌、B8菌细胞融合 |
| 4.3.2 原生质体的筛选与鉴定 |
| 4.3.3 单一、复合菌株溶藻和脱氮聚磷效能测定 |
| 4.3.4 响应面的实验设计 |
| 4.3.5 溶藻产物元素变化 |
| 4.3.6 溶藻前后毒性测试 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 融合菌XR_1的鉴定 |
| 4.4.2 融合菌XR_1溶藻效能研究 |
| 4.4.3 响应面应面法优化XR_1菌溶藻效能 |
| 4.4.4 二次响应面回归模型的建立 |
| 4.4.5 响应面三维图分析 |
| 4.4.6 最佳溶藻条件的预测 |
| 4.4.7 融合菌XR_1脱氮、除磷效能研究 |
| 4.4.8 溶藻前后藻液急性毒性实验 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 潜流湿地净化装置对蟹池养殖尾水效能研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验设计和实验材料 |
| 5.2.2 水质分析方法 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 潜流湿地污染物降解效能研究 |
| 5.3.1.1 湿地脱氮效能 |
| 5.3.1.2 湿地除磷效能 |
| 5.3.1.3 湿地降解COD_(Mn)与叶绿素a去除效能 |
| 5.3.2 潜流湿地生物相特征 |
| 5.3.2.1 浮游藻类变化 |
| 5.3.2.2 微型动物变化 |
| 5.3.3 细菌变化 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 改良式人工潜流湿地提标改造蟹池示范工程应用 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 材料与方法 |
| 6.2.1 示范工程选址及改造 |
| 6.2.2 水质情况 |
| 6.2.3 实验设计 |
| 6.2.4 实验方法 |
| 6.3 结果与讨论 |
| 6.3.1 污染物去除效果及降解动力学分析 |
| 6.3.1.1 氨氮降解及其动力学特性分析 |
| 6.3.1.2 总氮、硝态氮降解及其动力学特性分析 |
| 6.3.1.3 总磷及溶解性磷盐降解及其动力学特性分析 |
| 6.3.1.4 高锰酸盐指数(COD_(Mn))降解及其动力学特性分析 |
| 6.3.2 湿地内生物相特征 |
| 6.3.2.1 湿地内细菌特征 |
| 6.3.2.2 湿地内藻类变化分析 |
| 6.3.2.3 湿地内藻类多样性变化 |
| 6.4 本章小结 |
| 7 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（3）磁性纤维蛋白—琼脂糖水凝胶的制备、表征、生物相容性及复合人脐带间充质干细胞的体外软骨构建（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词简表 |
| 前言 |
| 第一部分 生物磁性纤维蛋白-琼脂糖复合支架的制备、表征及生物学特性研究 |
| 1.1 材料、方法 |
| 1.1.1 试剂、仪器 |
| 1.1.2 方法与步骤 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 磁性纤维蛋白-琼脂糖水凝胶/MFAH生物支架宏观形态 |
| 1.2.2 显微镜 |
| 1.2.3 扫描电镜结果 |
| 1.2.4 孔隙率和孔径 |
| 1.2.5 溶胀率(Swelling Rate,SR) |
| 1.2.6 机械性能 |
| 1.2.7 震动样品磁强计(VSM) |
| 1.2.8 X射线光电子能谱仪(XPS) |
| 1.2.9 能谱仪(EDS) |
| 1.2.10 热重分析(TG) |
| 1.2.11 CCK8 检测FAH支架对UMSCs增殖影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 第二部分 人脐带来源间充质干细胞的分离、培养、鉴定、冻存及复合FAH的体外软骨构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.2 实验方法与步骤 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 脐带间充质干细胞鉴定 |
| 2.2.2 人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的形态 |
| 2.2.3 人脐带间充质干细胞(UCMSCs)的增殖 |
| 2.2.4 人脐带间充质干细胞(UCMSCs)复合磁性纤维蛋白琼脂糖(MFAH)细胞支架构建组织工程软骨 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三部分 结论与总结 |
| 3.1 主要结论 |
| 3.2 研究展望与不足 |
| 3.2.1 不足 |
| 3.2.2 展望 |
| 综述 磁性材料在骨科领域的应用及研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表研究成果 |
| 致谢 |
（4）中国东南沿海球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）形态、分子及生活史特征的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 球形棕囊藻的生态学意义 |
| 1.1.2 中国东南沿海的球形棕囊藻藻华 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 棕囊藻属的研究历史 |
| 1.2.2 棕囊藻形态学研究现状 |
| 1.2.3 棕囊藻属的分子系统发育分析研究 |
| 1.2.4 球形棕囊藻生活史 |
| 1.3 研究意义与研究内容 |
| 2 中国东南沿海球形棕囊藻的形态特征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 藻种采集和纯化培养 |
| 2.2.2 比生长速率及囊体直径与囊体内细胞的关系 |
| 2.2.3 光学显微镜制样观察 |
| 2.2.4 扫描电镜制样观察 |
| 2.2.5 透射电镜制样观察 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 比生长率 |
| 2.3.2 小型鞭毛细胞形态特征 |
| 2.3.3 大型鞭毛细胞形态特征 |
| 2.3.4 囊体及囊体细胞形态特征 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 小型鞭毛细胞 |
| 2.4.2 大型鞭毛细胞 |
| 2.4.3 囊体和囊体细胞 |
| 2.5 小结 |
| 3 中国东南沿海球形棕囊藻的分子系统发育分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 藻种采集和纯化培养 |
| 3.2.2 DNA提取 |
| 3.2.3 DNA扩增和测序 |
| 3.2.4 构建系统发育树 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 16S rDNA序列系统发育分析 |
| 3.3.2 rbcL序列系统发育分析 |
| 3.3.3 18S rDNA序列系统发育分析 |
| 3.3.4 ITS1 序列系统发育分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 不同序列对棕囊藻分子进化关系研究的意义 |
| 3.4.2 中国东南沿海棕囊藻株系的起源 |
| 3.4.3 球形棕囊藻复合种 |
| 3.5 小结 |
| 4 中国东南沿海球形棕囊藻生活史的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 藻种采集和纯化培养 |
| 4.2.2 窄隙角毛藻与球形棕囊藻共培养 |
| 4.2.3 光学显微镜制样观察 |
| 4.2.4 扫描电镜制样观察 |
| 4.2.5 流式细胞术检测 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 囊体的形成和衰亡 |
| 4.3.2 细胞分裂和转化 |
| 4.3.3 细胞的缠绕和附着 |
| 4.3.4 窄隙角毛藻在球形棕囊藻生活史中的作用 |
| 4.3.5 球形棕囊藻细胞倍性和细胞周期的变化 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 囊体的形成 |
| 4.4.2 囊体的衰亡 |
| 4.5 小结 |
| 5.结论、不足及展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 不足 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 |
| 致谢 |
（5）阴道菌群特点及差异细菌生物膜促进宫颈癌变的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 宫颈病变患者阴道菌群特点及差异细菌筛选 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 阴道加德纳菌生物膜体外模型的建立及影响因素研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 阴道加德纳菌生物膜诱导宫颈癌前细胞发生上皮间质转化而发挥促癌作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 阴道加德纳菌生物膜通过TLR_4-TGF-β_1/Smad信号通路诱导宫颈癌前细胞发生EMT |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 阴道加德纳菌的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）负载丁酸钠的多孔磺化聚醚醚酮通过免疫调控加强抗菌和成骨作用的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 免疫调控在机体抗菌和成骨分化过程中的作用 |
| 1.3 生物材料的免疫调控作用的研究进展 |
| 1.4 PEEK材料在骨生物材料中的研究进展 |
| 1.5 本研究的实验设计方法及思路 |
| 第二章 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的制备、材料表征及细胞增殖检测 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料及方法 |
| 2.2.1 本章节所使用主要仪器设备与试剂 |
| 2.2.2 多孔磺化PEEK的制备 |
| 2.2.3 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的制备 |
| 2.2.4 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的扫描电镜分析 |
| 2.2.5 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的能谱分析 |
| 2.2.6 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的离子释放检测 |
| 2.2.7 细胞的提取、培养、传代、冻存和复苏 |
| 2.2.8 RAW264.7 巨噬细胞在材料表面的细胞毒性和增殖检测 |
| 2.2.9 大鼠骨髓间充质干细胞(r BMSCs)在材料表面的细胞毒性和增殖检测 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的表面形态 |
| 2.3.2 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的能谱分析结果 |
| 2.3.3 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的离子释放结果 |
| 2.3.4 RAW264.7 巨噬细胞在材料表面的细胞毒性和增殖检测结果 |
| 2.3.5 r BMSCs在材料表面的细胞毒性和增殖检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK的体外直接抗菌和免疫抗菌作用的研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 本章节所使用主要仪器设备与试剂 |
| 3.2.2 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的准备 |
| 3.2.3 细菌在材料表面培养的平板涂布检测 |
| 3.2.4 细菌在材料表面培养的扫描电镜检测 |
| 3.2.5 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK对巨噬细胞吞噬作用的影响 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 细菌在材料表面培养的平板涂布结果 |
| 3.3.2 细菌在材料表面培养的扫描电镜结果 |
| 3.3.3 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK对巨噬细胞吞噬作用的检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 负载丁酸钠的多孔PEEK的体外直接成骨和免疫成骨作用的研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料及方法 |
| 4.2.1 本章节所使用主要仪器设备与试剂 |
| 4.2.2 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK对巨噬细胞极化状态的影响 |
| 4.2.3 r BMSCs的碱性磷酸酶(ALP)活性检测 |
| 4.2.4 条件培养基的准备 |
| 4.2.5 条件培养基下r BMSCs的 ALP及茜素红(ARS)染色及定量 |
| 4.2.6 条件培养基下r BMSCs的 ALP免疫荧光染色 |
| 4.2.7 条件培养基下r BMSCs成骨基因RT-PCR检测 |
| 4.2.8 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 实验样品对巨噬细胞极化状态的检测结果 |
| 4.3.2 rBMSCs的 ALP活性检测结果 |
| 4.3.3 条件培养基下r BMSCs的 ALP及 ARS染色结果 |
| 4.3.4 条件培养基下r BMSCs的 ALP免疫荧光染色结果 |
| 4.3.5 条件培养基下r BMSCs成骨基因表达结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料在大鼠股骨骨髓炎模型中的实验研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料及方法 |
| 5.2.1 本章节所使用主要仪器设备与试剂 |
| 5.2.2 体内动物模型的建立 |
| 5.2.3 大鼠股骨骨髓炎样本的大体观察及micro-CT扫描 |
| 5.2.4 大鼠股骨样本的micro-CT扫描数据分析 |
| 5.2.5 大鼠股骨骨髓炎样本的石蜡切片及组织学染色 |
| 5.2.6 大鼠股骨样本的硬组织切片及Van-Gieson染色 |
| 5.2.7 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 大鼠股骨骨髓炎样本的大体观察及micro-CT扫描结果 |
| 5.3.2 大鼠股骨样本的micro-CT扫描数据分析结果 |
| 5.3.3 大鼠股骨骨髓炎样本的组织学染色结果 |
| 5.3.4 大鼠股骨样本的Van-Gieson染色结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 负载丁酸钠的多孔磺化PEEK材料在小鼠气囊模型中的实验研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料及方法 |
| 6.2.1 主要仪器和试剂 |
| 6.2.2 小鼠气囊模型的建立 |
| 6.2.3 小鼠气囊组织标本的石蜡切片及HE染色 |
| 6.2.4 小鼠气囊组织标本的免疫荧光染色 |
| 6.2.5 统计学分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 小鼠气囊组织标本的HE染色结果 |
| 6.3.2 小鼠气囊组织标本的免疫荧光染色结果 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文和学术成果 |
（7）儿茶酚功能化壳聚糖/牡蛎肽温敏水凝胶的制备及其性能研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 壳聚糖的改性及其应用研究 |
| 1.1.1 壳聚糖概述 |
| 1.1.2 壳聚糖接枝改性 |
| 1.1.3 壳聚糖交联改性 |
| 1.1.4 其他改性 |
| 1.1.5 改性壳聚糖复合材料的研究进展 |
| 1.2 牡蛎肽(OP)的研究进展 |
| 1.2.1 牡蛎肽概述 |
| 1.2.2 牡蛎肽的生物学功能 |
| 1.3 本课题的研究目的与意义 |
| 1.4 主要研究内容 |
| 1.4.1 主要研究内容 |
| 1.4.2 技术路线图 |
| 2 壳聚糖的儿茶酚官能化改性 |
| 2.1 实验试剂与仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 样品制备 |
| 2.2.2 紫外光谱分析 |
| 2.2.3 红外光谱分析 |
| 2.2.4 核磁共振氢谱(1HNMR)分析 |
| 2.2.5 热重分析 |
| 2.2.6 抗氧化能力分析 |
| 2.2.7 细胞毒性分析 |
| 2.2.8 溶血率分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.3.1 红外光谱、紫外光谱分析 |
| 2.3.2 ~1HNMR谱分析 |
| 2.3.3 水溶性评价 |
| 2.3.4 热稳定性研究 |
| 2.3.5 抗氧化性能研究 |
| 2.3.6 CS-C细胞毒性评价 |
| 2.3.7 溶血率结果 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 CS-C/β-GP温敏水凝胶的制备及表征 |
| 3.1 实验试剂与仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 样品制备 |
| 3.2.2 凝胶时间测定 |
| 3.2.3 红外光谱分析 |
| 3.2.4 扫描电镜分析 |
| 3.2.5 流变学性能分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 温敏水凝胶组成研究 |
| 3.3.2 红外光谱研究 |
| 3.3.3 微观结构研究 |
| 3.3.4 流变学性能研究 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 壳聚糖/牡蛎肽微球的制备与表征 |
| 4.1 实验试剂与仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 牡蛎肽(OP)分析 |
| 4.2.2 壳聚糖微球的制备 |
| 4.2.3 壳聚糖/牡蛎肽微球(CSMO)的制备 |
| 4.2.4 微球的粒径分析 |
| 4.2.5 微球的扫描电镜分析 |
| 4.2.6 微球的红外分析 |
| 4.2.7 微球的包封率与载药量测定 |
| 4.2.8 微球中释药曲线 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 牡蛎肽分析 |
| 4.3.2 微球微观形态研究 |
| 4.3.3 微球粒径分析 |
| 4.3.4 红外光谱研究 |
| 4.3.5 包封率载药量及释放曲线 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 CS-C/牡蛎肽温敏水凝胶的制备、表征、性能评价 |
| 5.1 实验试剂与仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 样品制备 |
| 5.2.2 扫描电镜分析 |
| 5.2.3 吸水率分析 |
| 5.2.4 对L929细胞增殖率分析 |
| 5.2.5 对L929细胞凋亡分析 |
| 5.2.6 Calcein-AM/PI活/死细胞双染分析 |
| 5.2.7 对L929细胞迁移分析 |
| 5.2.8 溶血率分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 微观结构研究 |
| 5.3.2 吸水性能 |
| 5.3.3 细胞活力 |
| 5.3.4 AM/PI对活/死细胞双染结果 |
| 5.3.5 细胞凋亡结果 |
| 5.3.6 细胞迁移 |
| 5.3.7 溶血率研究 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 CS-C/牡蛎肽温敏水凝胶在止血和创伤修复中的应用 |
| 6.1 实验试剂与仪器 |
| 6.2 止血实验方法 |
| 6.2.1 样品制备 |
| 6.2.2 全血凝血指数(BCI) |
| 6.2.3 体外促凝血时间 |
| 6.2.4 血小板粘附 |
| 6.2.5 红细胞吸附 |
| 6.2.6 动物止血模型 |
| 6.3 创伤修复实验方法 |
| 6.3.1 水凝胶样品 |
| 6.3.2 小鼠皮肤创伤模型的建立和给药 |
| 6.3.3 实验分组给药及创面愈合情况分析 |
| 6.3.4 肉芽组织中总蛋白含量测定 |
| 6.3.5 肉芽组织中炎症因子TNF-α、TL-6 含量的测定 |
| 6.3.6 组织切片染色分析 |
| 6.3.7 免疫组化分析 |
| 6.3.8 统计方法 |
| 6.4 结果与讨论 |
| 6.4.1 全凝血指数(BCI) |
| 6.4.2 体外促凝血活性 |
| 6.4.3 血小板粘附性能 |
| 6.4.4 红细胞吸附性能 |
| 6.4.5 小鼠出血模型止血评价 |
| 6.4.6 创面愈合情况研究 |
| 6.4.7 伤口处肉芽组织中总蛋白含量研究 |
| 6.4.8 创面伤口炎症因子含量研究 |
| 6.4.9 创面H&E染色结果分析 |
| 6.4.10 伤口处胶原蛋白含量研究 |
| 6.4.11 创面组织中VEGF和 Ki-67 表达的研究 |
| 6.5 本章小结 |
| 7 结论与展望 |
| 7.1 主要结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（8）基于肾主骨生髓理论研究淫羊藿苷调控外泌体内miR-122-5p对BMSCs成骨、迁移的作用及机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 理论研究 |
| 1.“肾主骨生髓”的中医理论背景 |
| 2.肾与骨、髓,肾精与干细胞之间的关系 |
| 3.传统中医药的现代验证和研究方法尝试 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 第一部分 兔骨髓间充质干细胞的提取、鉴定及培养 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 兔成骨细胞的提取、鉴定及培养 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 淫羊藿苷对骨髓间充质干细胞成骨、迁移作用的最佳浓度及时间规律 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 成骨细胞源性外泌体的提取及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 淫羊藿苷联合成骨细胞源性外泌体对骨髓间充质干细胞成骨、迁移的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六部分 成骨细胞源性外泌体的高通量测序及miRNAs分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 名词解释 |
| 第七部分 淫羊藿苷调控成骨细胞源性外泌体miR-122-5p对骨髓间充质干细胞成骨、迁移作用 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 附录1 综述 |
| 参考文献 |
| 附录2 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（9）灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 可降解连通多孔生物陶瓷人工骨材料的制备及性能表征 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验材料及试剂 |
| 1.2 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 多孔β-TCP支架材料的设计及制备 |
| 2.2 多孔β-TCP支架材料特性的检测 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 多孔β-TCP支架材料的微观形貌结果 |
| 3.2 多孔β-TCP支架材料的元素分析结果 |
| 3.3 多孔β-TCP支架材料接触角测定结果 |
| 3.4 多孔β-TCP支架材料的吸水率测定结果 |
| 3.5 多孔β-TCP支架材料的孔隙率测定结果 |
| 3.6 多孔β-TCP支架材料的生物力学检测结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 骨髓间充质干细胞的提取、培养、传代及鉴定 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验材料及试剂 |
| 1.3 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 骨髓间充质干细胞的提取及培养 |
| 2.2 骨髓间充质干细胞的纯化及传代 |
| 2.3 骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 骨髓间充质干细胞提取、培养 |
| 3.2 骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 灌注型生物反应器的设计与构建及灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 |
| 第一节 灌注型生物反应器的设计与构建 |
| 第二节 灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验材料及试剂 |
| 1.3 主要实验设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 骨髓间充质干细胞的接种及单纯三维动态灌注培养 |
| 2.2 细胞增殖检测 |
| 2.3 细胞形态检测 |
| 2.4 细胞存活率检测 |
| 2.5 细胞的碱性磷酸酶活力检测 |
| 2.6 实时荧光定量RT-PCR检测细胞成骨分化 |
| 2.7 蛋白印迹(Western-Blot)检测细胞成骨相关蛋白表达 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 细胞增殖检测结果 |
| 3.2 细胞形态观察结果 |
| 3.3 细胞存活率结果 |
| 3.4 细胞的碱性磷酸酶活性结果 |
| 3.5 实时荧光定量RT-PCR检测细胞的成骨分化结果 |
| 3.6 蛋白质免疫印迹检测细胞的成骨相关蛋白表达结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 在研期间学术成果 |
| 致谢 |
（10）一种新型自愈性水凝胶负载外泌体促进骨再生作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 绪论 |
| 0-1.种植区骨量不足问题 |
| 0-2.骨及骨再生 |
| 0-3.干细胞及其来源外泌体对骨再生作用 |
| 0-4.外泌体的应用 |
| 0-5.壳聚糖-DF-PEG体系水凝胶在组织工程领域的应用研究 |
| 0-6.骨移植材料 |
| 第一部分 提取并鉴定人脐带间充质干细胞来源外泌体 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 本章小结 |
| 第二部分 hucMSC-Exos对前成骨细胞及人脐静脉血管内皮细胞生物学行为的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三部分 珊瑚来源羟基磷灰石/丝素/乙二醇壳聚糖/DF-PEG水凝胶的制备与表征 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四部分 hucMSC-exo联合CHA/SF/GCS/DF-PEG水凝胶对骨缺损修复作用研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五部分 全文总结 |
| 本研究创新型评价 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 文献综述 自愈性水凝胶在生物医用材料领域的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、细胞融合的扫描电镜初步观察（论文参考文献）
- [1]羟基磷灰石涂层材料的生物安全性及有效性研究[D]. 孙聪慧. 烟台大学, 2021(11)
- [2]溶藻菌筛选、复合菌剂制备及在养殖尾水中的应用研究[D]. 许明宸. 常州大学, 2021(01)
- [3]磁性纤维蛋白—琼脂糖水凝胶的制备、表征、生物相容性及复合人脐带间充质干细胞的体外软骨构建[D]. 蔡金池. 兰州大学, 2021(12)
- [4]中国东南沿海球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）形态、分子及生活史特征的研究[D]. 霍铱萍. 暨南大学, 2020(12)
- [5]阴道菌群特点及差异细菌生物膜促进宫颈癌变的机制研究[D]. 刘莹. 昆明医科大学, 2020
- [6]负载丁酸钠的多孔磺化聚醚醚酮通过免疫调控加强抗菌和成骨作用的机制研究[D]. 杨超. 上海交通大学, 2020(01)
- [7]儿茶酚功能化壳聚糖/牡蛎肽温敏水凝胶的制备及其性能研究[D]. 张冬英. 广东海洋大学, 2020(02)
- [8]基于肾主骨生髓理论研究淫羊藿苷调控外泌体内miR-122-5p对BMSCs成骨、迁移的作用及机制[D]. 杨傲飞. 湖北中医药大学, 2020(08)
- [9]灌注型生物反应器中流速对β-TCP内间充质干细胞增殖及成骨分化的研究[D]. 封国超. 甘肃中医药大学, 2020(10)
- [10]一种新型自愈性水凝胶负载外泌体促进骨再生作用研究[D]. 王丽. 锦州医科大学, 2020(05)