多囊肾囊肿液生化成分分析及其临床意义

一、多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义（论文文献综述）

刘宗涛^[1]（2018）在《钙激活氯离子通道ANO1在卵巢癌发生与发展中的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理卵巢癌发病率排女性生殖系统恶性肿瘤第3位,而死亡率排妇科恶性肿瘤之首。世界范围来看,卵巢癌发病率在发达国家为9.1/10万,而在发展中国家为5.0/10万,2017年,美国女性约有22440人罹患卵巢癌,其中14080人死于卵巢癌。2015年,中国约有52100名女性被确诊为卵巢癌,约22500名女性患者死于卵巢癌。上皮性卵巢癌按病理分型主要有浆液性卵巢癌,粘液性卵巢癌,透明细胞癌和子宫内膜癌四种类型。尽管被称为“无声杀手”,但超过80%的病人仍有症状,并且这些症状与妇女生理状况、胃肠道疾病及泌尿系疾病的症状相似,容易导致误诊。卵巢癌细胞可通过腹膜种植、血液及淋巴进行转移,只有20%的病人能够在卵巢癌局限于卵巢组织内（Ⅰ期）时被发现,90%早期发现患瘤的病人可以得到预后较好的治疗。当疾病波及盆腔器官（Ⅱ期）,腹腔（Ⅲ期）及转移超出腹膜（Ⅳ期）时,卵巢癌的治愈率及预后逐期递减,所以卵巢癌的早期诊疗至关重要。尽管肿瘤标记物CA-125的应用已经提高了卵巢癌的筛查效率,但是其他疾病能累及腹膜及胸膜的疾病也会导致CA-125升高,所以CA-125诊断卵巢癌的的特异度并不高,仍然会导致误诊。所以,临床上亟需发现新型无创、高灵敏度及特异度的肿瘤标记物。尽管70%的术后病人对铂类及紫杉醇类药物敏感,但是在服用一定疗程后会发生耐药,耐药问题促使研究者寻找新的敏感药物对其进行治疗。早在2004年就有多个研究组发现,DOG1在胃肠间质肿瘤中高表达,后来陆续在口腔癌中发现高表达,造成相同基因的不同命名如TMEM16A,TAOS2,ORAOV2。直到在2008年,三个独立的实验室同年发现DOG1基因表达的是一种钙激活氯离子通道蛋白,并重新命名为ANO1（anoctamin 1）。Anoctamin家族包括10名成员,分别为ANO1-10。目前的研究表明,ANO1和ANO2两个成员具有氯离子通道的功能。ANO1具有10跨膜区域的蛋白结构,广泛表达于具有分泌作用的腺体上皮细胞中,包括唾液腺、胰腺等腺体,气道上皮,平滑肌及感觉神经元中。ANO1功能主要是介导跨上皮的例子转运及调节气管液体分泌、胃肠蠕动、外分泌腺分泌、肾脏功能及平滑肌收缩及伤害感知。近几年来的研究表明,ANO1在多种上皮来源的肿瘤如头颈淋巴癌、肺癌、胃癌、胃肠间质瘤、前列腺癌、口腔癌、胰腺导管癌、乳腺癌、肝癌、前列腺癌等肿瘤组织中高表达,并促进肿瘤的发生与发展。卵巢癌以上皮细胞来源的肿瘤常见,上皮性卵巢癌占到卵巢癌的90%。既然ANO1高发于上皮起源的肿瘤中,那么在上皮性卵巢癌组织的表达如何呢?ANO1是否也具有或通过什么机制促进上皮性卵巢癌发生与发展的作用?为了回答这些问题,本课题从收集卵巢癌病人的卵巢癌组织标本入手,在发现ANO1蛋白在卵巢癌组织标本有高表达的基础上,采用基因沉默、生物化学、细胞生物学、药理学和整体荷瘤小鼠模型等手段开展了针对ANO1在卵巢癌的发生与发展中作用的确证研究及可能的作用机制。目的:探讨ANO1在人上皮性卵巢癌发生与发展中的作用及可能的作用机制。方法:采用免疫组化方法检测ANO1在人正常卵巢组织,人卵巢良性肿瘤及恶性肿瘤中的表达,评估ANO1表达程度与性别、病理分化程度,病理分期及病理类型等临床参数的相关性。荧光定量PCR（聚合酶联反应）方法检测正常人群及卵巢癌患者的外周血单个核细胞中ANO1 mRNA的扩增水平。Western-blot方法检测ANO1蛋白在卵巢癌细胞中的表达。在来源于浆液性卵巢癌的SKOV3和Caov-3及来源于透明细胞癌组织的ES-2细胞系中检测ANO1的表达情况。通过设计针对ANO1的siRNA干扰序列（ANO1-siRNA1,ANO1-siRNA2）和无干扰作用的混乱序列（Scrambled siRNA）作为对照,应用瞬时转染技术沉默ANO1基因,在细胞水平上研究ANO1对卵巢癌的作用。MTT法检测沉默ANO1对SKOV3细胞活性的作用。EdU法检测沉默ANO1对SKOV3细胞DNA复制的影响。软琼脂平板克隆形成实验检测沉默ANO1对细胞增殖能力的影响。划痕实验评估沉默ANO1对SKOV3细胞迁徙能力的影响。Transwell实验评估沉默ANO1对SKOV3细胞侵袭能力的影响。体内实验评估沉默ANO1对异植瘤生长能力的影响。PDX（Patient-derived xenograft）实验评估沉默ANO1对PDX异植瘤生长的影响。细胞汇合度及Western-blot实验探索沉默ANO1抑制肿瘤生长的作用机制及涉及的细胞信号通路。结果:1.采用免疫组化的方法检测了正常卵巢组织12例,卵巢癌患者74例（粘液性癌40例,浆液性癌18例,子宫内膜样癌12例,透明细胞癌4例）,卵巢良性肿瘤38例。免疫组化结果显示,ANO1在正常卵巢组织中阳性表达有0例,表达率为0%;在卵巢良性肿瘤中阳性表达有7例,表达率为18.4%;在卵巢癌中阳性表达有58例,表达率为78.3%。卡方检验统计表达率之间有统计学意义。在卵巢癌患者组织中,卡方检验分析显示,根据FIGO（International Federation of Gynecology and Obstetrics）病理分期,III/IV晚期患者组高表达ANO1率为72.4%,I/II早期患者组高表达ANO1率为27.6%,两组ANO1的表达有统计意义。高分化、中分化与低分化高表达ANO1率分别为12.6%、60%、57.1%。结果表明越是晚期,分化程度越差,ANO1的表达越高。ANO1的表达程度跟年龄分组及病理类型不相关,而跟病理分期及分化程度相关。2.RT-PCR结果表明ANO1基因在浆液性卵巢癌患者的外周血单个核细胞中扩增水平较高,其相对?-actin的扩增水平平均值为6.8×10-3。而非癌患者组外周血中的ANO1mRNA全部处于较低扩增水平,其扩增水平相对?-actin的平均值为7.8×10-5。两组均值相差近百倍,具有统计学意义。9例在外周血单个核细胞中高扩增ANO1基因的浆液性卵巢癌患者有7例在术后ANO1扩增水平明显下降。表明ANO1的基因扩增与卵巢癌相关。3.Western-blot实验结果显示,ANO1蛋白在来源于浆液性癌的SKOV3及Caov-3细胞系中高表达,而在来源于透明细胞癌的ES-2细胞中低表达。4.选择ANO1表达较高的细胞系SKOV3进行沉默ANO1作用的研究。Western-blot实验结果显示,对照组的ANO1高表达,scrambled siRNA组的ANO1也高表达,表达水平与对照组一致。而ANO1 siRNA1组与ANO1 siRNA2组的ANO1表达明显受到抑制。说明干扰序列能有效的沉默ANO1.5.MTT实验结果显示,相对于Scrambled siRNA组,转染ANO1-siRNA1和ANO1-siRNA2而沉默SKOV3细胞中的ANO1后,SKOV3细胞活力显着降低。并且ANO1-siRNA2的抑制效率更高。6.EdU实验结果显示,ANO1-siRNA2组细胞核中掺入的Edu数量要少于Scrambled siRNA组,表明沉默ANO1表达后,SKOV3细胞的DNA复制过程受到抑制。7.软琼脂克隆形成实验表明,当沉默SKOV3细胞系中ANO1后ANO1-siRNA2组中细胞克隆数明显少于Scrambled siRNA组。表明沉默ANO1后SKOV3细胞的增殖能力及群体依赖生长能力降低。8.划痕实验显示,ANO1-siRNA2组不同时间点的空白面积多于Scrambled siRNA组,划痕闭合明显变慢。表明沉默ANO1后抑制了SKOV3细胞的迁移能力。9.Transwell实验结果显示,ANO1-siRNA2组穿过基质胶到达下室的细胞明显少于Scrambled siRNA组,表明沉默ANO1能抑制SKOV3细胞的侵袭能力。10.体内实验显示,PBS对照组瘤体的平均体积及瘤重为837.5±102.7mm3和1.7±0.17g,ANO1-siRNA2组瘤体的平均体积及瘤重为267.5±46.62mm3和0.63±0.15g,Scrambled siRNA组瘤体的平均体积及体重为860.5±64.3mm3和1.8±0.22g。结果表明,沉默ANO1能明显抑制裸鼠体内SKOV3细胞所致异植瘤的生长。11.Patient-derived Xenugraph（PDX）实验的免疫组化结果显示,在4例来源于浆液性卵巢癌的患者组织中,OVPF160087患者的ANO1高表达（+++）,OVPF004、OVPF031、OVPF027三例患者都是中度表达（++）。随机选取OVPF004构建PDX模型进行体内实验。实验结果表明沉默ANO1能抑制PDX异植瘤的生长。12.机制研究的结果显示,在来源于浆液性癌的SKOV3及Caov-3细胞系中,沉默ANO1基因后会降低ANO1蛋白表达及Akt的磷酸化水平。细胞融合实验显示,采用PI3K信号通路抑制剂LY294002作用于正常表达及沉默ANO1的SKOV3及Caov-3细胞系中,ANO1的促SKOV3及Caov-3细胞生长作用明显受到抑制。结果表明,阻断PI3K-Akt信号通路能阻断ANO1促癌细胞生长作用,ANO1可能通过激活PI3K-Akt信号通路发挥在上皮性卵巢癌中的作用。结论:1.钙激活氯离子通道蛋白ANO1在人卵巢癌组织、血液及卵巢癌细胞中高表达,而在良性卵巢肿瘤及正常卵巢组织中低表达或检测不到表达,且其表达水平与癌组织的病理分期与分化程度呈正相关。以上结果表明ANO1在卵巢癌发生时高表达。2.沉默ANO1可抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移及侵袭能力以及小鼠荷瘤的生长。以上结果表明ANO1参与了卵巢癌的发生发展。3.在卵巢癌SKOV3及Caov-3细胞系中抑制ANO1的表达能降低Akt磷酸化水平。用抑制剂LY294002阻断Akt信号通路能抑制ANO1的促肿瘤细胞生长作用。以上结果表明ANO1通过PI3K-Akt通路发挥作用,ANO1可作为防治卵巢癌的靶点。

杨贞^[2]（2013）在《输尿管镜囊肿内切开引流术治疗肾囊肿的观察与护理》文中研究表明单纯性肾囊肿的自然发生率约为0.5%～5.7%[1]。囊肿小于4 cm而无症状者一般无需治疗,有腰痛、尿血、感染,或囊肿压迫集合系统引起肾积水,或压迫肾实质、肾血管引起高血压,或囊肿在小儿患者引起呼吸运动受限时则需进行治疗[2]。近年来,我科采用经输尿管镜下肾囊肿内切开引流术治疗肾囊肿,进行评价并随访,结合临床综合护理,疗效显着,现报告如下。

王晓平,蓝志相,黎承阳,邓耀良,玉海,黄延伟,胡斌,杨金玉^[3]（2009）在《经输尿管镜下囊肿内切开引流术治疗肾囊肿》文中研究说明目的探讨经输尿管镜下囊肿内切开引流术治疗肾囊肿的手术疗效和安全性。方法肾囊肿患者30例。其中肾盂旁囊肿11例,单发囊肿15例,多发囊肿4例。既往肾囊肿手术史者3例。囊肿直径平均6.9（4.0～11.2）cm。影像学检查均可见囊肿对集合系统压迫形成的压迹。使用输尿管镜经尿道顺行至肾盂径路,观察肾囊肿对集合系统的压迫情况,直视下用电刀在囊肿压迫肾盂明显处位置做内切开,使其与集合系统贯通,并置双J管内引流。结果 30例手术均一次成功,囊肿处理时间平均31（15～45）min。手术时间平均61（30～120）min,住院时间平均6.5（4～7）d。无严重并发症发生。术后12 d实验室检查患者蛋白尿消失。平均随访6（3～9）个月,其中囊肿消失24例,明显缩小4例,复发2例。结论经尿道输尿管镜技术处理肾囊肿具有安全、微创、近期疗效确切等优点。

丁虹彬,孙国庆,王勇^[4]（2003）在《多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义》文中研究表明 多囊肾是指肾脏的实质部分出现多个囊肿的一种肾脏疾病,临床分为遗传性及非遗传性。南京第一人民医院自1998年以来收治成人多囊肾152例,其中102例在超声引导下穿刺402个囊肿,同时对各个囊肿液进行生化检查及尿八联检查。

二、多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义（论文提纲范文）

（1）钙激活氯离子通道ANO1在卵巢癌发生与发展中的作用及机制研究（论文提纲范文）

四、多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义（论文参考文献）

• [1]钙激活氯离子通道ANO1在卵巢癌发生与发展中的作用及机制研究[D]. 刘宗涛. 青岛大学, 2018(07)
• [2]输尿管镜囊肿内切开引流术治疗肾囊肿的观察与护理[J]. 杨贞. 微创医学, 2013(01)
• [3]经输尿管镜下囊肿内切开引流术治疗肾囊肿[J]. 王晓平,蓝志相,黎承阳,邓耀良,玉海,黄延伟,胡斌,杨金玉. 中华泌尿外科杂志, 2009(03)
• [4]多囊肾囊肿液生化成份分析及其临床意义[J]. 丁虹彬,孙国庆,王勇. 同济大学学报(医学版), 2003(06)

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