一、鱼生长激素在水产养殖中的应用（论文文献综述）
茹笑影[1]（2021）在《雌激素调控金钱鱼生长激素二态性表达的研究》文中认为
宋飞彪[2]（2019）在《igf3基因在鲤性腺发育中的作用及其调控机制》文中认为鱼类的性腺发育是一个复杂的过程,包括性腺发生和性细胞逐渐成熟,在该过程中,脑/下丘脑-垂体-性腺（Hypothalamic-pituitary-gonad axis,HPG）轴发挥着主要的调控作用。胰岛素样生长因子系统（Insulin like growth factors,IGFs）是生长轴和生殖轴相交联的关键因子,是一类具有胰岛素样代谢和促进有丝分裂功能的单链多肽。IGFs家族基因包含3个配体（igf1,igf2,igf3）,2个受体（igf1r,igf2r）和6个结合蛋白（igfbp1-igfbp6）。IGFs在促进细胞生长与分化、抑制细胞死亡、促进细胞代谢和调节机体渗透压等方面具有重要作用,同时也是介导生长激素的主要促生长因子,是调节动物生长发育的重要因子之一。自从igf3基因在鱼类的卵巢被发现后,IGFs在鱼类性腺发育中的功能越来越受到关注,人们对鱼类GH-IGFs轴的研究方向也开始从生长向生殖转变。目前,igf3基因仅在少数鱼类和两栖类中被发现,并且igf3mRN A都是最高表达于性腺组织。研究表明,其对鱼类的精原细胞的增殖与分化、精子发生、促进卵母细胞成熟和促进排卵等方面都有重要作用。然而,对于其功能的研究才刚刚起步,并且主要集中在鱼类性腺发育和配子的发生,关于igf3基因对鱼类性腺发育的具体调控途径和调控机制还不清楚,这表明igf3对性腺的重要功能将是一个重要的研究领域。鲤（Cyprinus carpio）是中国主要的淡水养殖鱼类之一,也是常用于研究淡水鱼类内分泌调控的模式生物之一。福瑞鲤（FFRC strain common carp,Cyprinus carpio）是以建鲤和黄河鲤为原始亲本选育而得的水产养殖新品种,是农业部“十二五”主推的大宗淡水养殖鱼类新品种,目前已在国内绝大部分地区推广养殖,在水产养殖中发挥举足轻重的作用,已成为我国农业增效、农民增收的重要途径之一。经继续选育,2017年获得了福瑞鲤2号新品种,其生长速度又获得提高。然而,生长性状的提高只是表象,其涉及到的分子机制还不是十分清楚。因此,本研究以选育的福瑞鲤2号（FFRC No.2 strain common carp,Cyprinus carpio）为研究材料,对igf3基因在鲤性腺发育中的作用进行研究。本研究通过cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得igf3基因全长序列,分析了其在鲤组织中的表达和性腺组织亚细胞定位;采用双链RNA干扰技术,构建了鲤活体干扰模型,并对干扰前后的鲤性腺组织进行lncRNA测序,确定与igf3基因和性腺发育相关lncRNAs以及调控途径;建立了鲤igf3基因的体外原核表达体系,并表达Igf3重组蛋白,同时采用GST Pull-down和质谱技术进行Igf3蛋白与上下游蛋白的互作研究,并进行了 Igf3重组蛋白的体内功能验证。主要研究结果如下:1.通过提取鲤性腺组织总RNA,采用cDNA末端快速扩增技术成功克隆得到两条完整的鲤igf3基因序列,并进行了序列分析、组织表达和定位分析。igf3 mRNA主要在鲤性腺中表达,其中igf3a在卵巢成熟期和衰退期、精巢的衰退期表达量最高;igf3b在卵巢的衰退期和精巢的成熟期表达量最高。Western Blot在精巢中能够检测到大小约为21kDa和34kDa的两条特异性条带。免疫组织化学显示,Igf3分别定位于精巢的精原细胞和精子细胞以及卵巢中早期和晚期发育阶段的卵泡细胞和颗粒细胞。腹腔注射雌激素E2能够影响鲤精巢和卵巢中igf3基因的表达水平。2.成功合成了鲤igf3基因dsRNA,并探索出了在进行igf3基因干扰时igf3-dsRNA的最佳注射部位、注射浓度以及igf3-dsRNA效果持续时间,成功建立了鲤igf3基因活体干扰技术,为下一步利用dsRNA体内注射研究igf3基因功能提供了技术支撑。通过60天的连续干扰实验,结果发现igf3基因被敲降后,对鲤幼鱼的生长性能无显着性影响,但是能显着抑制卵巢和精巢的发育,并显着影响促性腺激素和固醇类性激素的分泌。对脑/下丘脑-垂体-性腺轴相关基因的表达情况分析发现,敲降igf3基因能显着降低IGF家族基因在脑/下丘脑-垂体-性腺轴的表达。3.利用dsRNA干扰技术建立igf3基因被敲降的鲤活体模型,并对该模型进行高通量测序。分别从对照组和实验组中鉴定出327169410个和306305018个 clean reads。经过严格的筛选,RNA-seq 获得了 14199 个 lncRNAs 和 106932个mRNAs转录本,其中124个和353个lncRNAs和mRNAs差异表达。GO分析显示这些差异表达的lncRNAs靶基因和mRNAs与细胞内雌激素/雄激素受体信号传导通路和雌雄性腺发育有关。KEGG分析表明,这些差异表达的lncRNAs靶基因和mRNAs与Wnt、PI3K-Akt和TGF-β三种特异性信号通路有关,并且在这三种信号通路涉及到一些相同的差异表达基因,表明igf3基因可能通过IGF/Wnt/PI3K-Akt/TGF-β信号通路发挥作用。LncRNA-mRNA共表达网络显示,igf3基因被干扰后,上调了 lncRNA MSTRG.42108的表达表达水平,继而诱导了细胞周期蛋白依赖性激酶、Tbx18、Fgfr2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因家族等基因的表达,进而影响性腺细胞的信号转导途径、细胞周期、分化、支持细胞以及生殖细胞分化,并最终调节性腺发育。结果提示,lncRNAMSTRG.42108可能是igf3基因的负调控因子,在igf3基因被干扰后性腺的发育中起重要作用。4.成功构建鲤igf3基因大肠杆菌PGEX-6P-1表达载体,诱导后,Igf3重组蛋白大部分在包涵体中表达,小部分在上清中表达,纯化后,获得了纯度约为80%的重组蛋白,并且经Western Blot验证为目的蛋白。之后采用GST pull-down进行蛋白互作分析,发现多条与Igf3蛋白互作的蛋白,并采用Western Blot验证了 pull-down结果的准确性。对差异条带进行质谱分析,鉴定出84个互作蛋白,GO和KEGG富集分析发现,Igf3蛋白可能通过PI3K-Akt-mTOR-AMPK信号通路,主要在细胞内发挥作用,并且涉及到细胞中的多个细胞器,能够调控细胞的生长、发育以及细胞代谢过程。5.通过对鲤腹腔Igf3重组蛋白,发现注射不同浓度的Igf3重组蛋白都能降低igf3基因在性腺的表达量,并且持续降低至48或72h至最低值后开始上升。每周两次,连续60天的注射实验发现,注射Igf3重组蛋白能够显着抑制卵巢发育,并影响IGF家族基因在脑/下丘脑-垂体-性腺轴的表达,注射后的前两周能够显着提高鲤生长速度。
吕晴霁,潘忠超,石和荣,杨慧荣,王树启,赵会宏[3]（2017）在《斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的发酵》文中研究表明将含有石斑鱼生长激素基因的毕赤酵母X33进行震荡培养后,装入≥50L的自控罐中,2830.5℃、pH 5.56.0、溶解氧≥30mg/L条件下发酵84h,生产石斑鱼生长激素基因重组蛋白。发酵期间,通过甲醇诱导毕赤酵母获得目的蛋白的高效表达,最后通过Western Blot和SDS-PAGE聚丙酰胺凝胶电泳对目的蛋白进行定性定量检测。最终获得目的蛋白表达量约为1.52.0g/L,约占胞外可溶性总蛋白的16.4%。本试验用自控罐发酵生产含有斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的毕赤酵母生产工艺,为实现工业化生产鱼类生长激素饵料添加剂奠定基础。
潘忠超,石和荣,杨慧荣,王树启,赵会宏[4]（2014）在《饲料中添加生长激素基因重组蛋白对斜带石斑鱼生长、消化及抗氧化能力的影响》文中研究表明为了探究体外表达的斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白在海水鱼养殖中的应用前景,将其酵母表达基因重组蛋白上清液按照2,4,8 mg/kg的添加量喷涂饲料（分组记为G1、G2和G3）,与空白对照（记为G0）共4组,每组设3个平行,进行斜带石斑鱼室内工厂化养殖试验。饲养期间,早中晚各投喂1次,每日测1次水质指标,经10周的饲养,结果如下:①生长性能方面,G2组斜带石斑鱼增质量率最高,为293.16%,显着高出G0组23.75%（p<0.05）,饲料系数最低,为1.14,G2组斜带石斑鱼在体长增长率以及均摄食量方面显着高于G0组（p<0.05）;②形态学及体成分方面,G2组全鱼粗蛋白含量最高,显着高于G0组（p<0.05）,鱼体肌肉中粗脂肪的含量显着低于G0组（p<0.05）;③血脂方面,G1、G2和G3组鱼的胆固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯含量均低于G0组,且G1和G2组的低密度脂蛋白显着低于G0组（p<0.05）;④消化酶活性方面,试验组斜带石斑鱼的淀粉酶活性均高于对照组,其中G2组最高,显着高于G0组（p<0.05）;脂肪酶活性试验组均显着高于对照组（p<0.05）;⑤抗氧化指标方面,试验组斜带石斑鱼肌肉总抗氧化能力显着高于G0组（p<0.05）;⑥磷酸酶活性方面,G2组鱼的磷酸酶活性最高,在肝脏中G2组鱼的磷酸酶活性最高且显着高于对照组（p<0.05）。以上结果表明:在饲料中添加4 mg/kg的生长激素基因重组蛋白对于斜带石斑鱼的生长具有明显的促进作用且能提高饲料利用率;还可明显降低斜带石斑鱼的血脂水平,提高其消化能力和抗氧化能力。
刘芝亮[5]（2013）在《半滑舌鳎生长轴关键基因的重组表达及对生长与生殖的调控机制研究》文中认为本文以我国鲆鲽类主导养殖品种—半滑舌鳎（Cynoglossussemilaevis Günther）为研究对象，运用分子克隆、原核表达和Westernblotting等技术手段成功构建了半滑舌鳎GH、IGF-I和IGF-II体外原核表达系统，得到了纯化的具有生物活性的体外重组蛋白；通过腹腔注射诱导的方法验证了外源重组牛GH蛋白和重组半滑舌鳎IGF-I蛋白对半滑舌鳎的促生长作用，从血清GH和IGF-I表达水平、消化酶活力等角度探讨了这种促生长作用的机制；最后，组合运用组织切片、酶联免疫吸附测定（ELISA）和荧光实时定量PCR等方法研究了GH和IGF-I在半滑舌鳎生殖周期中的表达特性和可能的调控作用机制，为深入认识半滑舌鳎生殖调控机制提供了理论支撑。本研究结果为全面揭示半滑舌鳎生长轴在生长和生殖中的调控作用提供了更为丰富的基础资料相关结果如下：1.半滑舌鳎GH、IGF-I和IGF-II的原核表达和活性分析根据半滑舌鳎类胰岛素生长因子-Ⅰ和Ⅱ的cDNA全长序列，分析并设计引物克隆得到编码IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ成熟肽序列，其成熟肽序列均由210个碱基组成，编码70个氨基酸，包括B-C-A-D四个功能域。利用PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体pET-28a上，得到重组质粒，将重组质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）后经IPTG诱导产生N端含6个组氨酸的融合蛋白。以SDS-PAGE电泳检测和SigmaScan软件分析获得的蛋白，结果表明：IGF-Ⅰ融合蛋白大小为11.4KD，在37℃条件下IPTG诱导3h时目的蛋白表达量最高，占细菌总蛋白的58.5%，融合蛋白主要以包涵体形式存在。IGF-Ⅱ融合蛋白大小也为11.4KD，在IPTG诱导2h时目的蛋白表达量最高，占细菌总蛋白的43.7%。利用Western blotting方法验证这两种融合蛋白均可特异性的被6×His抗体识别。诱导表达蛋白后的菌液沉淀经6mol/L盐酸胍变性、Ni2+离子亲和柱纯化和尿素梯度复性，获得大小为11.4KD的纯化蛋白。细胞增殖实验表明，本研究所得IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ融合蛋白能显着促进人乳腺癌细胞MDA231细胞的增殖，具有明显的生物学活性。根据半滑舌鳎生长激素（GH）基因的cDNA全长序列，分析并设计引物克隆得到编码GH的成熟肽序列，此序列由552个碱基组成。利用PCR方法将扩增片段克隆到原核表达载体pET-28a上，得到重组质粒，将重组质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）后经IPTG诱导产生N端含6个组氨酸的融合蛋白。SDS-PAGE电泳检测和SigmaScan软件分析表明：GH融合蛋白大小为26KD，在IPTG诱导4h时目的蛋白表达量最高，占细菌总蛋白的41.5%，主要以包涵体形式存在。利用Western blotting方法验证GH融合蛋白可特异性的被6×His抗体识别。诱导表达后的菌液沉淀经纯化和复性后，获得大小为26KD的纯化蛋白。纯化后的GH融合蛋白稀释后以ELISA方法测定分析，结果显示本研究获得的半滑舌鳎GH融合蛋白具有抗原活性。细胞增殖试验发现较高浓度的重组半滑舌鳎GH在体外具有抑制人乳腺癌细胞MDA231细胞增殖的特性，表明其可能具有生物学活性。2．重组GH和IGF-I对半滑舌鳎幼鱼生长的影响及机制研究利用注射诱导方法认识了外源重组牛GH和重组半滑舌鳎IGF-I对半滑舌鳎幼鱼生长的影响，并从血清生长相关激素水平和消化酶角度分析了其可能的机制。结果表明：10μg/尾的外源重组牛GH可促进半滑舌鳎的生长，体重增重率比对照组高28.38%；2.5μg/尾和25μg/尾的重组半滑舌鳎IGF-I可显着促进半滑舌鳎生长，体重增重率比对照组分别高35.75%和50.91%（P＜0.05）。快速生长的试验鱼饵料转化效率升高，肠道蛋白酶和淀粉酶活力升高，但血清中GH和IGF-I表达水平变化不明显。这些结果表明外源GH或IGF-I可促进养殖半滑舌鳎的生长，其可能主要是通过提高试验鱼的饵料转化效率和消化酶活力实现的。本研究结果为深入认识半滑舌鳎生长轴（GH/IGF-I axis）的调控作用机制和建立实用的半滑舌鳎养殖生长调控技术提供了基础资料。3.半滑舌鳎GH与IGF-I对卵巢发育的调控作用及机制研究利用组织切片技术将半滑舌鳎卵巢发育划分为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ5个时期，采用荧光实时定量PCR方法检测在卵巢发育的不同时期半滑舌鳎垂体GH和脑、垂体、性腺、肝脏IGF-I基因mRNA的表达水平变化，并利用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法研究了半滑舌鳎血清中GH和IGF-I的表达水平变化。结果表明：随卵巢的发育垂体GHmRNA表达水平水平逐渐升高，在产卵期（Ⅴ期）达峰值（P＜0.05），在产卵结束后迅速下降（P＜0.05）。肝脏IGF-I mRNA表达水平自Ⅱ期开始缓慢下降并在Ⅳ期达到最低水平（P＜0.05），在产卵期（V期）又开始缓慢升高，当产卵结束后（Ⅵ期）迅速上升达到最高水平（P＜0.05）。卵巢IGF-I mRNA表达水平自Ⅱ期开始显着升高（P＜0.05）并在Ⅳ期达峰值（P＜0.05），在V期明显降低（P＜0.05）并保持至产卵结束后的Ⅵ期。垂体IGF-I mRNA表达水平在Ⅲ期明显升高（P＜0.05），但其后下降至Ⅱ期水平，但在产卵结束后的Ⅵ期迅速升高至较高水平（P＜0.05）。脑中IGF-I mRNA表达水平自Ⅲ期开始显着升高（P＜0.05）并在V期时达峰值（P＜0.05）。卵巢发育至Ⅱ期和Ⅲ期时半滑舌鳎血清GH表达水平差异不显着，在Ⅲ期时表达水平最低，但在产卵期（Ⅴ期）达到峰值，与其它各期差异显着（P<0.05），其变化规律与垂体GH mRNA表达水平的变化规律具有一致性。血清中IGF-I表达水平在Ⅳ期时达到最低水平，其后在V期时显着升高（P<0.05），并在产卵结束后（Ⅵ期）达到最高水平，与其它各期差异显着（P<0.05）。这些结果提示，半滑舌鳎生长轴关键基因GH和IGF-I同样是生殖功能的重要调节因子之一,GH-IGFs系统与下丘脑-垂体-性腺轴共同参与生殖调控，这些结果为今后深入认识半滑舌鳎生殖调控机制提供了新的素材。
谢帝芝[6]（2011）在《重组生长激素酵母饲料的研究》文中研究说明生长激素（Growth hormone, GH）是脊椎动物脑垂体分泌的促进机体生长发育的单链多肽激素。正常鱼体内生长激素分泌量少,不能满足水产养殖的需要,利用重组DNA技术与大规模培养技术,开展鱼类GH基因工程酵母菌饲料的研究,对鱼类生长激素在养殖中的应用具有重要的科学意义及应用价值。本研究根据GenBank数据库中登记的青鱼（Mylopharyngodon piceus）生长激素基因序列（AF389238）设计特异性引物,采用RT-PCR技术扩增青鱼生长激素（black carp growth hormone, bcGH） cDNA编码区,定向插入含强启动子AOXI的表达载体pPIC3.5k,电击转入毕赤酵母GS115菌株。经甲醇诱导表达,蛋白表达产物的SDS-PAGE和ELISA检测,bcGH在酵母胞内得到正确表达,成功获得重组鱼生长激素酵母（重组bcGH酵母）。250 mL三角瓶中,在pH值6.5、0.5%甲醇、温度30℃和培养时间72 h的诱导条件下,目的蛋白的表达量高达893mg/L。利用正交实验探讨了重组bcGH酵母在豆粕中的发酵条件。结果表明,温度、pH值、培养时间、豆粕浓度、接种量和诱导剂浓度均对生长激素蛋白表达量有影响,在时间96 h, pH6.5,接种量6%,发酵温度30℃,诱导剂浓度1%,豆粕浓度7%等优化条件下,活菌数达到7.96×109cfu/mL, bcGH表达量最高。以重组bcGH酵母发酵豆粕进行鲫鱼生长试验,考察生长性能、血清指标以及IGF基因表达等指标,结果表明,实验组饲料生长性能和血清指标差异明显（p<0.05）,其中相对体重生长率、尿素氮、三碘甲状腺原氨酸T3、甲状腺素、胰岛素水平差异极显着（P<0.01）。肝脏IGF-Ⅰ和IGF-ⅡmRNA相对表达量差异极显着（P<0.01）综上所述,本研究将重组bcGH酵母诱导发酵的豆粕直接添加到鲫鱼基础饲料中,配制成重组bcGH酵母饲料,并将其运用到鱼类养殖上,显着提高了鲫鱼生长性能及其相关基因的表达,为研发绿色、安全、高效的新型微生物渔用配合饲料奠定了基础。
郝羽[7]（2011）在《军曹鱼生长激素基因（GH）的克隆和表达》文中研究指明生长激素（Growth Hormone）是GH/PRL/SL家族的一个成员,其功能是对鱼类的生长发育、繁殖等起着非常重要的调控作用。DNA重组技术为GH基因重组提供了可能性,实现了外源生长激素在鱼体中的促生长作用。本论文以军曹鱼为研究对象,对该鱼的生长激素（GH）基因进行克隆和原核表达,并对GH基因在军曹鱼各组织中的表达分布进行了分析。根据鲈形目GH基因氨基酸序列的同源性设计了一对简并性引物来扩增军曹鱼脑垂体cDNA,获得了军曹鱼GH基因cDNA片段后用同源克隆的方法获得了军曹鱼GH基因3’和5’非编码区域,进而得到军曹鱼GH基因全长cDNA序列。最后通过设计特异性引物扩增军曹鱼脑垂体基因组DNA,获得了内含子的序列。该基因序列全长1780bp,其中5’端非编码区为（5’-UTR）77 bp,3’端非编码区（3’-UTR）为170 bp,整个开放阅读框（OFR）长1533 bp,包括5个外显子和4个内含子,cDNA序列全长615 bp,编码204个氨基酸,其中含22个信号肽和182个成熟肽,预测分子量约为23.17 kDa,理论等电点为6.43。氨基酸序列比对发现,军曹鱼GH基因与哺乳动物和四脚动物的同源性低于40%,与鲈形目鱼类的同源性高于80%,其中与鲯鳅的同源性最高,同源性达到97.5%。生长激素是生长轴（GH-IGF-1）的重要组成部分,它控制鱼类的生长和发育。生长激素通过结合肝细胞膜受体后在许多组织中起作用,本研究通过实时荧光定量PCR方法,分析了GH基因在成体军曹鱼10个组织的表达差异,结果表明,GH基因在军曹鱼脑垂体中表达量最高,其次是性腺,而在肝脏,脑,心脏,肾脏,脾脏,胃,肌肉和鳃中有极少的表达量。采用T-A克隆构建pMD18-T-CoGH重组质粒,测序正确后经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切获得CoGH片段,插入表达载体pET-28a,转化到大肠杆菌宿主菌BL21（DE3）中进行表达,表达产物通过SDS-PAGE显示为分子量23kDa的蛋白条带,经过western blotting检测后发现目的蛋白与His抗体特异性结合,证明目的基因在大肠杆菌中成功表达。本实验优化了GH基因在大肠杆菌中的表达条件,从宿主菌、诱导温度、诱导时间、诱导剂的浓度等方面进行优化,实验显示军曹鱼GH基因在宿主菌BL21中不表达,而在BL21（DE3）中则大量表达。该基因在温度为37℃,诱导剂IPTG的终浓度为1 mmol/L时诱导4 h,蛋白的表达量最大,但可溶性较差。通过超声波破碎实验证明该基因随着温度的降低蛋白的可溶性逐渐提高,在25℃时诱导有较好的效果。
朱华平,卢迈新,黄樟翰,高风英,杨丽萍[8]（2010）在《鱼类遗传改良研究综述》文中研究表明本文对全世界范围内鱼类遗传改良研究的概况及其有关问题进行了全面的介绍和评述,从选择育种、杂交育种、性别控制、多倍体诱导、细胞核移植和细胞融合、低温保存技术、DNA分子标记育种、转基因技术等方面系统介绍了鱼类遗传改良的方法、在水产养殖中的应用和已取得的成就,并对鱼类遗传改良今后的发展趋势进行了展望,旨在为今后进一步开展鱼类遗传改良研究提供参考。
盖永锋,张国广,陈元婷,陈亮[9]（2008）在《金鱼生长素Ⅰ基因的原核表达及其多克隆抗体制备》文中提出鱼生长激素（Fish growth hormone,fGH）是鱼类脑垂体中分泌的促进生长的单一亚基的蛋白激素.它参与鱼的生长代谢,能够加速蛋白质合成和脂类降解等生理功能,具有增强食欲、提高饲料转化率的作用.用引入酶切位点BamHⅠ和NotⅠ的引物,以质粒pBluescript SK-gfGHⅠ为模板,PCR扩增获得了gfGHⅠ编码区序列,分别定向插入原核表达载体pET-28a中,构建了原核表达载体pET28a-gfGHⅠ,pET28a-gfGHⅠ转化大肠杆菌BL21（DE3）,在1.0 mmol/L IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）诱导下,表达出融合蛋白（His）6 tag-gfGHⅠ,该蛋白分子量大约为26 ku;经MALDI-TOF-MS以及抗HIS抗体的Western blotting鉴定,该融合蛋白即为表达的目的蛋白;经超声破碎鉴定该蛋白为包涵体形式存在,用连续超声破碎的方法,回收该蛋白纯度可达85.1%,免疫小鼠,间接ELISA法检测抗体效价为1∶1 600.该抗体的获得为gf-GHⅠ基因在酵母和水稻中的异源表达及功能鉴定奠定了基础.
刘文珍,徐节华,田飞焱[10]（2008）在《水产养殖中微生物的应用及研究进展》文中研究说明在水产养殖中使用微生物可以防治疾病,丰富水产动物的营养来源,提高水产动物的免疫力,为养殖业提供肥料,改善养殖生态环境以及诱导贝类附着和防治有害藻类,另外,工程菌在水产养殖中的应用也有了深入的研究。文章主要就微生物在水产养殖中的应用以及进展作一详细的综述。
二、鱼生长激素在水产养殖中的应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鱼生长激素在水产养殖中的应用（论文提纲范文）
（2）igf3基因在鲤性腺发育中的作用及其调控机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 绪论 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 鱼类性腺发育及其影响因素研究进展 |
| 1.1 鱼类卵巢发育研究进展 |
| 1.1.1 卵巢的发育分期 |
| 1.1.2 卵母细胞发育时相 |
| 1.2 鱼类精巢发育研究进展 |
| 1.2.1 精巢的结构 |
| 1.2.2 精子的发生过程 |
| 1.3 影响鱼类性腺发育的因素 |
| 1.3.1 环境因素 |
| 1.3.2 性类固醇激素 |
| 1.4 鱼类性腺发育的调控机制 |
| 2 胰岛素样生长因子(IGFs)系统 |
| 2.1 IGFs系统简介 |
| 2.2 IGFs的分子结构 |
| 2.3 IGFs系统与鱼类性腺的关系 |
| 2.4 igf3基因研究现状 |
| 3 RNA干扰技术研究 |
| 3.1 RNA干扰的原理 |
| 3.2 RNA干扰技术在水产上应用 |
| 4 长链非编码RNA研究进展 |
| 4.1 长链非编码RNA的定义及分类 |
| 4.2 LncRNA的功能 |
| 4.3 LncRNA的作用机制 |
| 4.4 LncRNA在性腺发育中的研究进展 |
| 5 重组蛋白在水产上应用 |
| 5.1 重组蛋白表达系统 |
| 5.2 重组蛋白在水产上的应用 |
| 6 选题依据及技术路线 |
| 6.1 选题依据 |
| 6.2 技术路线 |
| 第二章 鲤igf3基因的克隆、定位及组织表达分析 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 样品制备 |
| 2.2.2 组织RNA提取及质量检测 |
| 2.2.3 第一链cDNA合成 |
| 2.2.4 igf3基因克隆 |
| 2.2.5 igf3基因序列分析 |
| 2.2.6 组织表达分析 |
| 2.2.7 性腺不同发育时期表达分析 |
| 2.2.8 鲤Igf3抗体制备 |
| 2.2.9 蛋白提取和Western Blot分析 |
| 2.2.10 免疫组化分析 |
| 2.2.11 雌激素E2对igf3基因的影响 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鲤igf3基因克隆及序列分析 |
| 3.2 氨基酸序列比对 |
| 3.3 进化树分析 |
| 3.4 组织表达分析 |
| 3.5 性腺不同发育时期表达分析 |
| 3.6 Western Blot分析 |
| 3.7 Igf3在鲤卵巢和精巢中的定位分析 |
| 3.8 雌激素对igf3基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 鲤igf3基因活体干扰及对生长和性腺发育的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验鱼 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 鲤igf3-dsRNA制备 |
| 2.2.2 鲤igf3基因RNA干扰条件筛选 |
| 2.2.3 igf3基因长期活体干扰 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鲤igf3-dsRNA的制备 |
| 3.2 最佳注射部位筛选 |
| 3.3 最佳注射剂量筛选 |
| 3.4 时间依赖性干扰结果 |
| 3.5 igf3基因干扰对鲤生长及性腺发育的影响 |
| 3.6 igf3基因干扰对鲤血清性激素水平的影响 |
| 3.6.1 对血清促性腺激素含量的影响 |
| 3.6.2 对血清雌激素含量的影响 |
| 3.6.3 对血清雄激素含量的影响 |
| 3.7 igf3基因干扰对鲤幼鱼HPG轴相关基因表达影响 |
| 3.7.1 对igf3基因表达的影响 |
| 3.7.2 对igf2基因表达的影响 |
| 3.7.3 对igf1基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 鲤igf3基因干扰后lncRNA和mRNA表达研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验鱼 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 RNA干扰 |
| 2.2.2 总RNA提取及质量检测 |
| 2.2.3 文库构建和测序 |
| 2.2.4 测序质量评估 |
| 2.2.5 序列比对与组装 |
| 2.2.6 lncRNA预测 |
| 2.2.7 差异表达分析 |
| 2.2.8 LncRNA靶基因预测 |
| 2.2.9 GO和KEGG功能富集分析 |
| 2.2.10 测序结果qRT-PCR验证 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 鲤性腺组织学观察 |
| 3.2 igf3基因干扰效率 |
| 3.3 RNA提取质量检测 |
| 3.4 测序数据质量评估与数量统计 |
| 3.5 lncRNA和mRNA鉴定 |
| 3.6 差异lncRNAs和mRNAs筛选 |
| 3.7 LncRNA靶基因预测 |
| 3.8 差异lncRNAs靶基因及mRNAs转录本GO分析 |
| 3.9 差异lncRNAs靶基因及mRNAs转录本KEGG分析 |
| 3.10 差异lncRNAs和mRNAs共表达网络分析 |
| 3.11 差异lncRNAs和mRNAs荧光定量PCR验证 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 鲤卵巢Igf3互作蛋白的筛选与鉴定 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 菌株和质粒 |
| 2.1.3 主要实验试剂 |
| 2.1.4 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 Igf3重组蛋白载体构建 |
| 2.2.2 重组蛋白表达及纯化 |
| 2.2.3 Igf3重组蛋白质检 |
| 2.2.4 GST pull-down |
| 2.2.5 质谱分析 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 PCR产物鉴定 |
| 3.2 原核表达载体鉴定 |
| 3.3 Igf3重组蛋白表达与鉴定 |
| 3.4 Igf3重组蛋白纯化与鉴定 |
| 3.5 GST pull-down SDS-PAGE和Western Blot检测 |
| 3.6 质谱鉴定 |
| 3.6.1 鉴定结果统计 |
| 3.6.2 GO功能分析 |
| 3.6.3 KEGG富集分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第六章 Igf3重组蛋白对鲤生长及性腺发育的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验鱼 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 鲤Igf3重组蛋白制备 |
| 2.2.2 Igf3重组蛋白注射条件筛选 |
| 2.2.3 Igf3重组蛋白体内功能验证 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 最佳注射剂量筛选 |
| 3.2 时间持续性结果 |
| 3.3 对鲤生长及性腺发育的影响 |
| 3.4 对鲤HPG轴相关基因表达影响 |
| 3.4.1 对igf3基因表达的影响 |
| 3.4.2 对igf2基因表达的影响 |
| 3.4.3 对igf1基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在读期间取得的学术成果 |
（3）斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的发酵（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 菌种 |
| 1.1.2 试剂及仪器 |
| 1.1.3 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 |
| 1.1.4 改良基本盐培养基 |
| 1.1.5 营养盐培养基 |
| 1.1.6 PTM1 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 菌种的保存与扩大培养 |
| 1.2.2 摇瓶发酵 |
| 1.2.3 自控罐发酵 |
| 1.2.4 湿质量检测与测定 |
| 1.2.5 SDS-PAGE电泳 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 自控罐发酵 |
| 2.1.1 发酵诱导前后发酵液温度和pH变化 |
| 2.1.2 诱导前后发酵液溶解氧的变化 |
| 2.1.3 诱导前后菌体湿质量的变化 |
| 2.2 重组蛋白的Western Blot鉴定 |
| 2.3 蛋白质量浓度的测定以及目的蛋白表达量的估算 |
| 2.4 发酵上清液目的蛋白表达量随时间的变化 |
| 3 讨论 |
| 3.1 培养基的选择对发酵的影响 |
| 3.2 pH以及发酵温度对发酵的影响 |
| 3.3 甲醇体积分数对发酵效果的影响 |
| 3.4 最佳发酵时间的确定 |
| 4 结论 |
（4）饲料中添加生长激素基因重组蛋白对斜带石斑鱼生长、消化及抗氧化能力的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1. 1 试验设计 |
| 1. 2 饲料制备 |
| 1. 3 试验器材及试剂 |
| 1. 4 样品处理 |
| 1. 5 指标测定 |
| 1.5.1生长指标的测定 |
| 1.5.2样品分析 |
| 1. 6 数据统计分析 |
| 2 试验结果 |
| 2. 1 基因重组生长激素对斜带石斑鱼生长性能的影响 |
| 2. 2 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼形态学和体成分的影响 |
| 2. 3 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼血脂的影响 |
| 2. 4 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼消化酶活性的影响 |
| 2. 5 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼体组织抗氧化指标的影响 |
| 2. 6 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼组织磷酸酶活性的影响 |
| 3 讨论 |
| 3. 1 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼生长性能的影响 |
| 3. 2 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼形态学和体成分的影响 |
| 3. 3 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼生化指标的影响 |
| 3. 4 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼消化酶活性的影响 |
| 3. 5 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼组织抗氧化指标的影响 |
| 3. 6 饲料中添加重组GH对斜带石斑鱼组织磷酸酶活性的影响 |
（5）半滑舌鳎生长轴关键基因的重组表达及对生长与生殖的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 生长激素（GH）的研究进展 |
| 1.1 生长激素生理功能 |
| 1.2 生长激素的测定 |
| 1.3 鱼类 GH 的克隆和表达 |
| 2 类胰岛素促生长因子（IGFs）研究进展 |
| 2.1 IGFs 的结构和生理功能 |
| 2.2 IGFs 基因克隆和表达 |
| 3 未来研究展望 |
| 第二章 半滑舌鳎 GH、IGF-I 和 IGF-II 的原核表达和活性分析 |
| 第一节 半滑舌鳎 IGF-I 的原核表达及生物活性分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验用鱼 |
| 1.2 相关试剂的配制 |
| 1.3 实验流程图 |
| 1.4 半滑舌鳎 IGF-I 成熟肽的克隆 |
| 1.5 重组表达载体的构建 |
| 1.6 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与检测 |
| 1.7 重组蛋白纯化和复性 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 半滑舌鳎 IGF-I 成熟肽克隆 |
| 2.2 IGF-I/PET28a 重组质粒的构建 |
| 2.3 重组质粒在大肠杆菌 BL21(DE3)中的表达 |
| 2.4 IGF-I 融合蛋白的 Western-blotting 验证 |
| 2.5 IGF-I/PET28a 融合蛋白的纯化 |
| 2.6 重组蛋白的生物活性检测 |
| 3 讨论 |
| 第二节 半滑舌鳎 IGF-II 原核表达及活性分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验用鱼 |
| 1.2 IGF-Ⅱ成熟肽的克隆 |
| 1.3 IGF-Ⅱ/pET28a 重组质粒的构建 |
| 1.4 重组 IGF-Ⅱ/pET28a 质粒在大肠杆菌中诱导表达 |
| 1.5 IGF-Ⅱ融合蛋白 western-blotting 验证 |
| 1.6 IGF-Ⅱ融合蛋白纯化和复性 |
| 1.7 IGF-Ⅱ融合蛋白生物活性检测 |
| 2 结果 |
| 2.1 半滑舌鳎 IGF-Ⅱ成熟肽的克隆 |
| 2.2 IGF-Ⅱ/PET28a 重组质粒的构建 |
| 2.3 重组质粒在大肠杆菌 BL21(DE3)中的表达 |
| 2.4 IGF-Ⅱ融合蛋白的 western-blotting 验证 |
| 2.5 IGF-Ⅱ/PET28a 融合蛋白的纯化 |
| 2.6 重组蛋白的生物活性检测 |
| 3 讨论 |
| 第三节 半滑舌鳎 GH 原核表达及活性分析 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验用鱼 |
| 1.2 GH 成熟肽的克隆 |
| 1.3 构建原核表达载体 |
| 1.4 重组 GH/pET28a 质粒在大肠杆菌中诱导表达 |
| 1.5 GH 融合蛋白 western-blotting 验证 |
| 1.6 GH 融合蛋白纯化和复性 |
| 1.7 GH 融合蛋白的 ELISA 测定 |
| 1.8 GH 融合蛋白的生物活性检测 |
| 1.9 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 半滑舌鳎 GH 成熟肽的克隆 |
| 2.2 GH/PET28a 重组质粒的构建 |
| 2.3 重组质粒在大肠杆菌 BL21(DE3)中的表达 |
| 2.4 IGF-Ⅱ融合蛋白的 western-blotting 验证 |
| 2.5 GH 融合蛋白的 ELISA 测定 |
| 2.6 GH 融合蛋白的生物活性检测 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组 GH 和 IGF-I 对半滑舌鳎幼鱼生长的影响及机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验鱼来源与规格 |
| 1.2 重组牛 GH 和重组半滑舌鳎 IGF-I 来源 |
| 1.3 实验设计 |
| 1.4 生长分析 |
| 1.5 饵料转化效率分析 |
| 1.6 血清激素水平测定 |
| 1.7 肠道消化酶表达水平测定 |
| 1.8 数据统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 重组牛 GH 对半滑舌鳎生长的影响 |
| 2.2 重组半滑舌鳎 IGF-I 对半滑舌鳎生长的影响 |
| 2.3 血清 GH 和 IGF-I 的表达水平变化 |
| 2.4 肠道消化酶水平变化 |
| 3 讨论 |
| 第四章 半滑舌鳎 GH 与 IGF-I 对卵巢发育的调控作用及机制研究 |
| 1 实验材料和方法 |
| 1.1 实验鱼 |
| 1.2 取样方法及样品处理 |
| 1.3 性腺分期鉴定 |
| 1.4 总 RNA 提取和 cDNA 的合成 |
| 1.5 实时定量 PCR 检测 |
| 1.6 血清中 GH 和 IGF-I 的测定 |
| 1.7 数据处理 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 卵巢发育分期 |
| 2.2 垂体 GH mRNA 在卵巢不同发育阶段的表达特性 |
| 2.3 脑、垂体、肝脏和性腺 IGF-I mRNA 在卵巢不同发育阶段的表达特性 |
| 2.4 血清中 GH 和 IGF-I 浓度 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）重组生长激素酵母饲料的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 前言 |
| 2 生长激素研究进展 |
| 2.1 生长激素作用机理 |
| 2.2 生长激素的生理功能研究 |
| 2.2.1 促生长作用 |
| 2.2.2 对物质代谢的影响 |
| 2.2.3 对生殖生理的影响 |
| 2.2.4 对免疫功能的影响 |
| 2.2.5 其它作用 |
| 2.3 影响生长激素分泌的因素 |
| 3 生长激素基因工程菌研究进展 |
| 3.1 生长激素基因工程菌的构建及表达研究 |
| 3.1.1 生长激素基因在大肠杆菌中表达 |
| 3.1.2 生长激素基因在酵母中表达 |
| 3.1.3 生长激素在其它表达系统中的表达 |
| 3.2 外源生长激素的吸收机理 |
| 3.3 生长激素基因工程菌安全性评价 |
| 3.3.1 外源生长激素残留问题 |
| 3.3.2 诱导剂的副作用 |
| 3.4 生长激素基因工程菌的应用 |
| 4 研究目的和意义 |
| 第二章 重组生长激素酵母的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 菌株和质粒 |
| 1.1.3 主要药品和试剂 |
| 1.1.4 培养基 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 引物设计 |
| 1.2.2 青鱼脑垂体总RNA提取 |
| 1.2.3 cDNA第一链的合成 |
| 1.2.4 青鱼GH-cDNA克隆 |
| 1.2.5 pPIC3.5K-bcGH表达载体的构建 |
| 1.2.6 转化酵母细胞 |
| 1.2.7 多拷贝转化子的筛选及鉴定 |
| 1.2.8 重组酵母诱导表达和考染检测 |
| 1.2.9 蛋白纯化及Elisa鉴定 |
| 1.2.10 目的蛋白定量检测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 脑垂体总RNA提取结果 |
| 2.2 青鱼生长激素cDNA片段扩增 |
| 2.3 重组表达载体pPIC3.5K-bcGH的构建与鉴定 |
| 2.4 重组酵母的获得与鉴定 |
| 2.5 表达产物的鉴定及其表达条件优化 |
| 2.6 表达产物纯化及ELISA鉴定 |
| 2.7 目的蛋白含量测定 |
| 3 讨论 |
| 第三章 重组生长激素酵母液态发酵条件的研究 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 菌株 |
| 1.2 主要药品与试剂 |
| 1.3 培养基 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 种子培养方法 |
| 2.2 发酵培养方法 |
| 2.3 10L发酵罐发酵 |
| 2.4 活菌数和bcGH表达量的检测 |
| 2.4.1 YPD平板计数法检测 |
| 2.4.2 SDS-PAGE电泳检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 发酵条件单因素试验 |
| 3.1.1 发酵时间对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.1.2 发酵温度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.1.3 接种量对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.1.4 豆粕浓度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.1.5 诱导剂浓度对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.1.6 pH值对重组bcGH酵母生长及其表达量的影响 |
| 3.2 发酵条件多因子正交试验 |
| 3.2.1 发酵因素与水平的确定 |
| 3.2.2 正交试验结果及分析 |
| 3.3 正交试验验证试验 |
| 3.4 10L发酵罐发酵试验结果 |
| 4 讨论 |
| 第四章 重组生长激素酵母饲料促生长作用及其机理的研究 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂 |
| 2 试验方法 |
| 2.1 试验饲料设计 |
| 2.2 饲养试验 |
| 2.3 指标测定及方法 |
| 2.3.1 生长性能指标 |
| 2.3.2 血清指标 |
| 2.4 引物设计 |
| 2.5 湘云鲫肝脏总RNA制备 |
| 2.5.1 总RNA提取及电泳检测 |
| 2.5.2 总RNA Dnase酶处理 |
| 2.6 IGFs-cDNA片段克隆 |
| 2.7 实时荧光定量PCR |
| 2.8 数据处理 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 对鲫鱼生长性能的影响 |
| 3.2 对鲫鱼血清指标的影响 |
| 3.3 RNA浓度测定及质量鉴定 |
| 3.4 PCR扩增检测 |
| 3.5 对鲫鱼肝脏IGFs mRNA表达影响 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 创新与后续工作 |
| 参考文献 |
| 英文缩写名词索引 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）军曹鱼生长激素基因（GH）的克隆和表达（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 文献综述 |
| 1.1 生长激素的研究进展 |
| 1.1.1 生长激素的结构及同源性比较 |
| 1.1.2 生长激素的生理作用 |
| 1.2 鱼类生长激素的研究现状 |
| 1.2.1 鱼类生长激素的结构 |
| 1.2.2 鱼类生长激素的生理功能 |
| 1.2.3 鱼类生长激素的分泌和调节 |
| 1.3 鱼类生长激素基因的研究现状 |
| 1.3.1 鱼类GH 基因的分子结构 |
| 1.3.2 鱼类GH 基因多态性的研究 |
| 1.3.3 鱼类GH 基因的异源表达 |
| 1.4 本文研究的目的与意义 |
| 2 军曹鱼生长激素基因(GH)的克隆及序列分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 动物材料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 菌株和质粒 |
| 2.1.4 主要仪器设备 |
| 2.1.5 溶液及其配制方法 |
| 2.1.6 培养基及其配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 军曹鱼生长激素(GH)基因全长cDNA 的获得 |
| 2.2.2 军曹鱼生长激素(GH)基因组DNA 的获得 |
| 2.2.3 RT-PCR 产物的回收和连接 |
| 2.2.4 DH5α感受态的制备和转化 |
| 2.2.5 菌液PCR 鉴定阳性克隆和序列测定 |
| 2.2.6 序列分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 军曹鱼GH 基因cDNA 全长的获得 |
| 2.3.2 军曹鱼GH 基因序列分析 |
| 2.3.3 军曹鱼GH 基因结构分析 |
| 2.3.4 军曹鱼GH 基因的同源性分析及系统树的构建 |
| 2.4 讨论 |
| 3 GH 基因在军曹鱼各组织中的差异表达 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 引物设计 |
| 3.2.2 各组织cDNA 模板的制备 |
| 3.2.3 荧光定量PCR |
| 3.2.4 数据统计和分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 4 军曹鱼生长激素（GH）基因的原核表达 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 载体和菌株 |
| 4.1.3 仪器 |
| 4.1.4 溶液及其配制方法 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 军曹鱼GH 原核表达载体的构建 |
| 4.2.2 重组GH 在大肠杆菌中的表达 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 军曹鱼GH 基因编码区cDNA 的扩增 |
| 4.3.2 表达载体的构建 |
| 4.3.3 表达产物的确定 |
| 4.3.4 表达条件的优化 |
| 4.3.5 融合蛋白的Western-blotting 检测 |
| 4.4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（9）金鱼生长素Ⅰ基因的原核表达及其多克隆抗体制备（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材 料 |
| 1.2 方 法 |
| 1.2.1 原核表达载体构建 |
| 1.2.2 诱导表达及蛋白存在形式 |
| 1.2.3 目的表达蛋白的MALDI-TOF-MS分析 |
| 1.2.4 表达目的蛋白用抗HIS抗体的Western blotting检测 |
| 1.2.5 连续超声破碎法回收目的蛋白 |
| 1.2.6 免疫小鼠[8] |
| 1.2.7 间接ELISA法检测抗血清效价[9] |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 原核表达载体构建 |
| 2.2 诱导蛋白表达及其存在形式 |
| 2.3 目的表达蛋白的MALDI-TOF-MS分析 |
| 2.4 Western blotting蛋白特异性分析 |
| 2.5 连续超处波破碎法回收目的蛋白 |
| 2.6 间接ELISA检测抗血清效价 |
| 3 讨 论 |
四、鱼生长激素在水产养殖中的应用（论文参考文献）
- [1]雌激素调控金钱鱼生长激素二态性表达的研究[D]. 茹笑影. 广东海洋大学, 2021
- [2]igf3基因在鲤性腺发育中的作用及其调控机制[D]. 宋飞彪. 南京农业大学, 2019(08)
- [3]斜带石斑鱼生长激素基因重组蛋白的发酵[J]. 吕晴霁,潘忠超,石和荣,杨慧荣,王树启,赵会宏. 水产科学, 2017(01)
- [4]饲料中添加生长激素基因重组蛋白对斜带石斑鱼生长、消化及抗氧化能力的影响[J]. 潘忠超,石和荣,杨慧荣,王树启,赵会宏. 中山大学学报(自然科学版), 2014(03)
- [5]半滑舌鳎生长轴关键基因的重组表达及对生长与生殖的调控机制研究[D]. 刘芝亮. 上海海洋大学, 2013(05)
- [6]重组生长激素酵母饲料的研究[D]. 谢帝芝. 湖南农业大学, 2011(04)
- [7]军曹鱼生长激素基因（GH）的克隆和表达[D]. 郝羽. 广东海洋大学, 2011(06)
- [8]鱼类遗传改良研究综述[J]. 朱华平,卢迈新,黄樟翰,高风英,杨丽萍. 中国水产科学, 2010(01)
- [9]金鱼生长素Ⅰ基因的原核表达及其多克隆抗体制备[J]. 盖永锋,张国广,陈元婷,陈亮. 厦门大学学报(自然科学版), 2008(S2)
- [10]水产养殖中微生物的应用及研究进展[A]. 刘文珍,徐节华,田飞焱. 泛珠三角区域渔业经济合作论坛第三次年会会议论文, 2008